内皮细胞条件培养液IL-6对血管平滑肌细胞增殖和分泌的影响

发布时间：2018-09-12 09:26

【摘要】：目的：探讨内皮细胞活化对血管平滑肌细胞增殖及分泌的的影响及其中机制。 方法：(1)以不同浓度和不同干预时间的TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC),收集细胞上清液,用ELISA法测定内皮细胞IL-6的分泌,TUNEL法检测内皮细胞的凋亡；(2) HUVEC培养液中分别加入10ng/mlTNF-α或不加入TNF-α24h后,收集上清离心,用0.22um的微孔滤膜过滤,4℃保存备用,分别为A液和B液；(3)将脐静脉平滑肌细胞接种于培养板中分为4组：①刺激组：按1：1比例加入A液和DMEM培养液,②拮抗组：在刺激组基础上加入抗IL-6单抗,③对照组：按1：1比例加入B液和DMEM培养液,④空白组：仅加入DMEM培养液。分组后立即采集少量细胞上清液以ELISA法测定ICAM-1、 IL-8水平。继续培养24h后,再次采集上清液测定ICAM-1和IL-8水平,并收集血管平滑肌细胞以MTT法检测平滑肌细胞增殖的情况。 结果：1、TNF-α对血管内皮细胞分泌和凋亡的影响：(1) TNF-α浓度和作用时间对血管内皮细胞分泌IL-6的影响：课题对照组：(31.2±2.9) pg/ml、5ng/ml组：(95.4±4.9) pg/ml、10ng/ml组：(122.7±6.3) pg/ml、20ng/ml组：(132.5±7.1) pg/ml、40ng/ml组：(79.1±5.9) pg/ml;时间效应：对照组：(12.4±1.6) pg/ml、6h组：(79.3±5.5) pg/ml、12h组：(97.5±3.9) pg/ml、24h组：(122.7±6.3) pg/ml、48h组：(108.0±4.4) pg/ml;(2) TNF-α对血管内皮细胞凋亡的影响各时间点细胞凋亡指数测定：对照组：(0.029±0.004)、12h组：(0.140±0.005)、24h组：(0.255±0.006)、48h组：(0.329±0.013)。2、内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞增殖和分泌的影响：(1)内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞增殖的影响：四组细胞的OD值依次为(1.349±0.115)、(1.176±0.093)、(1.012±0.087)和(0.798±0.014),组间比较有显著性差异(F=22.315,P0.05)；(2)内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞分泌的影响：四组细胞上清液中ICAM-1和IL-8均较基线值有所增加,其中刺激组ICAM-1和IL-8分别较基线升高(0.222±0.044) ng/ml和(2.996±0.059) ng/ml,均高于拮抗剂组、对照组和空白组(P0.05)。 结论：TNF-α诱导内皮细胞活化,通过刺激IL-6释放,促进血管平滑肌细胞增殖和ICAM-1和IL-8等细胞因子的分泌。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of endothelial cell activation on proliferation and secretion of vascular smooth muscle cells and its mechanism. Methods: (1) the supernatant of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC),) was collected by TNF- 伪 stimulation with different concentration and different intervention time. ELISA assay was used to detect the secretion of IL-6 in endothelial cells and Tunel method was used to detect the apoptosis of endothelial cells. (2) after 10 ng / ml TNF- 伪 or no TNF- 伪 was added to the HUVEC medium for 24 hours, the supernatant was collected and centrifuged, and then stored at 4 鈩，

本文编号：2238593