维甲酸在体外对C2C12细胞系的增殖、凋亡和肌向分化的影响

发布时间：2018-10-17 16:49

【摘要】：背景：全反式维甲酸（atRA）是维生素A的活性代谢产物，通过与受体结合来发挥其在胚胎发育和器官形成、组织内平衡、细胞增殖、分化以及凋亡的作用。C2C12细胞是小鼠的成肌细胞，在体外可分化形成具有收缩性的肌管而被应用于体外骨骼肌的研究模型。 目的：研究体外条件下atRA对C2C12细胞增殖的影响；筛选对C2C12细胞增殖无影响的最大浓度，研究上述浓度的atRA对C2C12细胞凋亡和肌向分化过程的影响。 方法：1、通过CCK-8法及流式细胞术检测不同浓度atRA对C2C12细胞的增殖及细胞周期的影响，并选出体外条件下atRA对C2C12细胞系增殖无影响的最大浓度；2、在上述atRA浓度下，用荧光标记Annexin V和核酸染料PI通过流式细胞仪检测其对C2C12细胞凋亡的影响；3、应用SYBR GreenⅠ实时定量PCR技术检测肌向诱导分化状态下的C2C12细胞系中生肌决定因子（Myf5、MyoD、Myogenin和MRF4）的表达水平变化；4、应用免疫细胞化学法检测C21C12细胞系肌向分化过程中Myosin的表达并观察细胞的形态学改变。 结果：1、CCK-8结果显示当atRA体外浓度达到40μM时，可使C2C12细胞的增殖水平下降，有统计学意义（P0.05）；流式细胞结果显示当atRA体外浓度≤1μM时，对细胞周期无影响；当atRA浓度大于1μM时，可使在G0/G1期的C2C12细胞比例明显上升，有统计学意义（P0.05）。 2、当在体外培养C2C12细胞中添加1μM的atRA时，实验组与对照组中细胞凋亡水平无统计学差异（P0.05）。 3、当在体外肌向诱导分化条件下培养的C2C12细胞中添加1μM的atRA时，Myf5在实验组和对照组表达均呈上升趋势，但实验组低于对照组，且在分化第2天时二者结果有统计学意义（P0.05）；实验组中MyoD的表达在分化第0.5天时高于对照组且有统计学意义（P0.05）；Myogenin在实验组和对照组表达均呈上升趋势，实验组均高于对照组且在分化第2天时二者结果有统计学意义（P0.05）；MRF4的表达在各个时间点均无统计学差异（P0.05）。 4、Myosin表达于多核肌管的胞浆。分化第2天时，实验组和对照组均有多核肌管出现。到分化第6天时，更多发生分化的肌细胞融合形成更长的多核肌管。实验组中的肌管形态较对照组中更为细长。同时Myosin在多核肌管的表达逐渐增强。 结论：在C2C12细胞体外培养中，，atRA对细胞增殖和细胞周期影响均呈浓度依赖相关性；1μM的atRA对C2C12细胞凋亡无显著影响，但对其肌向分化具有明显调控作用。
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【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

【参考文献】

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1 秦瑞峰,顾晓明;生肌调节因子在肌肉发生和发育中的作用[J];口腔颌面外科杂志;2001年03期

2 刘桂中,赵剑华,王秀琴;维甲酸信号通路的生物学进展[J];生理科学进展;2000年04期

3 王红月,宋来凤;心脏发育与维甲酸信号转导通路[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1997年04期

4 赵微;薛建华;;小鼠成肌细胞培养方法的建立与优化[J];畜牧兽医科技信息;2008年04期

本文编号：2277317