大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞的分离和培养

发布时间：2018-10-23 10:28

【摘要】：目的:体外培养大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞(NSCs),观察其生长及诱导分化培养特点。方法:取孕12.5~14.5 d的SD大鼠,采用机械分离法获取中脑腹侧组织,剪碎并吹打成单细胞悬液后,以2×10~5个细胞/ml的密度接种到无血清NSCs培养基中以神经球法培养。培养神经球5~7 d后,按原密度进行传代培养,并取第三代培养的神经球用含10%胎牛血清(FBS)分化培养液分化培养,分化培养7 d后行免疫细胞化学鉴定。结果:神经球呈巢蛋白(nestin)阳性,诱导分化后的细胞作分别呈微管蛋白(βIII-Tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性。结论:经神经球法培养得到的大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞可自我增值,并可诱导分化成神经元和胶质细胞。
[Abstract]:Aim: to observe the growth and differentiation characteristics of neural stem cells derived from ventral mesencephalon of rat by (NSCs), culture in vitro. Methods: the ventral mesencephalic tissue was obtained from 12.5d 14.5 day pregnant SD rats. After being cut and blown into single cell suspension, 2 脳 10 ~ 5 cells / ml density was inoculated into serum-free NSCs medium and cultured with neurosphere method. The neurospheres were cultured for 5 ~ 7 days and cultured according to the original density. The third generation of neurons were cultured in the medium containing 10% fetal bovine serum (FBS). After 7 days of differentiation, the neurons were identified by immunocytochemistry. Results: the neuronal cells showed nestin (nestin) positive, the differentiated cells showed tubulin (尾 III-Tubulin) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) (GFAP). Conclusion: neural stem cells derived from the ventral midbrain of rat embryos cultured by the method of neurosphere can increase their value and differentiate into neurons and glial cells.
【作者单位】： 昆明医科大学第一附属医院神经外科;昆明医科大学分子临床医学研究院暨云南省干细胞和再生医学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(81360197,81241126) 云南省教育厅科学研究基金项目(2013C227) 云南省科技厅-昆明医学院联合专项(2014FB041)
【分类号】：R329.2

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