电穿孔法转染人原代成纤维细胞条件的优化

发布时间：2018-10-26 19:28

【摘要】：目的通过优化电穿孔转染条件,探讨影响人原代成纤维细胞电转染效率和转染后细胞存活率的因素,筛选出人原代成纤维细胞的最佳电转染条件。方法通过改变脉冲电压、脉冲次数和质粒浓度等条件,将含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGFP-N1电穿孔转染入人原代成纤维细胞。利用锥虫蓝染色检测细胞存活情况,采用流式细胞术检测转染24h后的转染效率。结果在低电压模式下,脉冲电压320V、质粒浓度为20μg/mL、脉冲1次时,人原代成纤维细胞的电转染效果最理想,转染效率达到(42.53±0.63)%,细胞存活率为(74.30±3.01)%。结论优化了人原代成纤维细胞的电转染条件,在保证细胞较高存活率的前提下提高了人原代成纤维细胞的电转染效率,为后续基因功能的研究打下基础。
[Abstract]:Objective to optimize the electroporation transfection conditions and to investigate the factors affecting the electrotransfection efficiency and survival rate of human primary fibroblasts, and to select the best electrotransfection conditions for human primary fibroblasts. Methods the plasmid pEGFP-N1 containing the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene was transfected into human primary fibroblasts by changing the pulse voltage, pulse number and plasmid concentration. Results under the low voltage mode, the transfection efficiency of the primary fibroblasts was (42.53 卤0.63)% when the pulse voltage was 320V, the plasmid concentration was 20 渭 g / mL, and the electrotransfection efficiency was (42.53 卤0.63)%. Conclusion the electrotransfection conditions of human primary fibroblasts were optimized, and the electrotransfection efficiency of human primary fibroblasts was improved on the premise of high survival rate, which laid a foundation for the further study of gene function.
【作者单位】： 第二军医大学长海医院实验诊断科;解放军东部战区73901部队;第二军医大学长海医院临床实验中心;第二军医大学长海医院烧伤科;
【基金】：国家自然科学基金(81172472) 中国博士后科学基金(2016M593004) 东方学者跟踪支持计划(GZ2015009)~~
【分类号】：R329.2

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本文编号：2296725