超滤法去除重组腺相关病毒中内毒素的应用

发布时间：2018-11-09 16:46

【摘要】：为探讨超滤法在重组腺相关病毒精制中的可行性,采用不同截留分子量的超滤管对重组腺相关病毒样品rAAV9-Kal进行超滤处理.利用鲎试剂盒和qPCR法定量检测截留液和滤过液中的内毒素和病毒含量,评价超滤技术对样品中内毒素的去除效果.结果表明:在乙二胺四乙酸二钠和脱氧胆酸钠的预处理下,30kD的超滤管对样品的回收率及内毒素去除率分别为0.912 2,0.870 6.因此,在单一超滤条件下,30kD的超滤管是重组腺相关病毒样品超滤纯化的最佳选择.
[Abstract]:In order to investigate the feasibility of ultrafiltration in the purification of recombinant adeno-associated virus, the rAAV9-Kal of recombinant adeno-associated virus samples was treated with ultrafiltration tubes with different molecular weights. The endotoxin and virus contents in the intercepting fluid and filtrate were measured by Limulus lysate kit and qPCR method to evaluate the removal effect of ultrafiltration technology on endotoxin in the sample. The results showed that the recovery rate and endotoxin removal rate of 30kD ultrafiltration tube were 0.912 ~ 0.8706, respectively, under the pretreatment of ethylenediamine tetraacetate disodium and deoxycholate sodium. Therefore, under the condition of single ultrafiltration, the ultrafiltration tube of 30kD is the best choice for ultrafiltration purification of recombinant adeno-associated virus samples.
【作者单位】： 华侨大学生物医学学院;福建医科大学基础医学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(2012AA020810) 福建省中青年教师教育科研项目(JA14020) 华侨大学科研基金资助项目(14BS111)
【分类号】：R373

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本文编号：2320998