AalDV-3介导的miRNA海绵载体构建及其在埃及伊蚊体内外的抑制效果测试

发布时间：2018-11-12 07:17

【摘要】：miRNA不仅广泛参与了蚊生长、发育的调控,还参与了媒介与病原体的相互作用,因此miRNAs可能作为蚊虫防制与蚊媒病原体控制的靶点,但目前尚无有效的转导系统。为研究白纹伊蚊浓核病毒-3(AalDV-3)是否可以作为有效的载体,我们利用内含子内表达miRNA海绵的策略,以埃及伊蚊内源性miR-210为靶基因,构建了重组病毒AalDV-anti-210。使用跨内含子引物通过RT-PCR验证了内含子可在蚊体内外的剪接效果,通过qPCR方法对埃及伊蚊Aag2细胞与埃及伊蚊幼虫的感染后的miR-210的表达水平进行检测。结果证实,含有miRNA海绵的内含子可以有效的蚊体内外剪接,重组病毒可以在蚊体内外高效的抑制靶miR-210的表达水平。该结果为探索AalDV-3在蚊虫基因功能研究及生物杀虫剂方面的潜在价值提供了理论依据。
[Abstract]:MiRNA is not only involved in the regulation of mosquito growth and development, but also in the interaction between vector and pathogen. Therefore, miRNAs may be the target of mosquito control and mosquito pathogen control, but there is no effective transduction system. In order to study whether Aedes albopictus concentrated nuclear virus (AalDV-3) can be used as an effective vector, we constructed the recombinant virus AalDV-anti-210. by using intron expression of miRNA sponge and targeting the endogenous miR-210 gene of Aedes aegypti. The splicing effect of intron in vivo and in vitro was verified by RT-PCR using transintron primer. The expression of miR-210 in Aag2 cells of Aedes aegypti and Aedes aegypti larvae after infection was detected by qPCR method. The results showed that the intron containing miRNA sponge could effectively splice the mosquito in vivo and in vitro, and the recombinant virus could effectively inhibit the expression of target miR-210 in vivo and in vitro. The results provide a theoretical basis for exploring the potential value of AalDV-3 in the study of mosquito gene function and biological insecticides.
【作者单位】： 曲阜师范大学医院防疫科;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
【分类号】：R373

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本文编号：2326439