人与猕猴不同组织多能性干细胞相关基因和标志抗原的表达分析

发布时间：2018-11-12 10:33

【摘要】：近来研究表明脐带、脐带血、羊水以及出生后外周血液中存在具有多分化潜能的干细胞,但研究结果不尽一致；Oct-4、Nanog、Sox-2、Rex-1、SSEAs作为胚胎干细胞的标志分子,常用于评价干细胞的多潜能性。本研究采用半定量RT-PCR法分析多能性干细胞相关基因Oct-4、Nanog、Sox-2以及Rex-1在人源脐带、脐带血、羊水组织以及猕猴外周血液中的表达情况,并对上述基因的扩增片段进行同源分析；同时用SP免疫组织化学法分析Oct-4、Nanog、Sox-2、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4在人源脐带组织中的表达和分布情况,其结果如下： 1、Oct-4、Nanog、Sox-2以及Rex-1基因在人源脐带、脐带血、羊水组织中均稳定表达(阳性率≥80%)；在上述组织中,Oct-4、Nanog, Sox-2以及Rex-1基因的表达水平存在差异,其在脐带和羊水中表达水平差异不显著(P0.05),但二者都显著高于脐带血(P0.05) 2、在不同生长阶段健康猕猴外周血液中Oct-4、Nanog和Sox-2基因均呈阳性表达(阳性表达率≥80%)；Oct-4、Nanog和Sox-2基因在猕猴外周血液中的表达水平与年龄呈负相关,但差异不显著(P0.05)。 3、将人源脐带、脐带血、羊水、猕猴外周血组织中扩增所得Oct-4、Nanog、Sox-2基因序列,与人、猕猴、猪、牛、小鼠、褐家鼠、狗、兔等部分物种上述基因cDNA序列同源性比较,结果显示,人与猕猴、兔、猪、牛有较高同源性(75%-95.9%),与小鼠和褐家鼠的同源性60%以上；上述基因序列生物进化分析的结果显示,克隆所得目的基因序列与人、猕猴相同基因的序列亲缘关系最近,三者构成亲缘关系最近的一个分支；再与猪、牛和狗的该基因构成一个较大的分支,其次亲缘关系依次为兔、大鼠和小鼠等。 4、在人源脐带组织中,均检测到表达Oct-4、Nanog、Sox-2、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4等标记分子的阳性细胞,阳性(阳性程度大于或等于(++))表达率在75%以上,且各标记分子阳性表达率差异不显著(P0.05),这些细胞主要分布于脐带组织的华尔通胶和脐血管周围,但血管内皮附近分布较少。
[Abstract]:Recent studies have shown that there are stem cells with multiple differentiation potential in umbilical cord, umbilical cord blood, amniotic fluid and postnatal peripheral blood, but the results are not consistent. As a marker of embryonic stem cells, Oct-4,Nanog,Sox-2,Rex-1,SSEAs is often used to evaluate the pluripotency of stem cells. The expression of Oct-4,Nanog,Sox-2 and Rex-1 in human umbilical cord, umbilical cord blood, amniotic fluid and peripheral blood of rhesus monkey were analyzed by semi-quantitative RT-PCR. The amplified fragments of the above genes were analyzed by homology analysis. At the same time, the expression and distribution of Oct-4,Nanog,Sox-2,SSEA-1,SSEA-3,SSEA-4 in human umbilical cord tissues were analyzed by SP immunohistochemical method. Sox-2 and Rex-1 genes were expressed stably in human umbilical cord, cord blood and amniotic fluid (positive rate 鈮，

本文编号：2326858