VEGF对人骨髓和脐带间充质干细胞中内皮细胞组分的影响

发布时间：2018-11-16 16:50

【摘要】：目的： 1.比较人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)和脐带间充质干细胞(UC-MSC)中的内皮祖细胞(EPC)及内皮细胞(EC)的比例。 2.探讨血管内皮生长因子(VEGF)对MSC中的内皮祖细胞(EPC)及内皮细胞(EC)比例的影响。 方法： 1.UC-MSC的分离培养：无菌条件下将新鲜脐带剪至1-2mm,利用植块法分离出贴壁细胞,置于37℃、5%O2恒温培养箱中培养,约1周后贴壁细胞铺满80%瓶底,用0.25%胰蛋白酶消化后,以5×104个/cm2细胞密度传代培养。 2.BM-MSC的分离培养：取成人骨髓3m1,使用淋巴细胞分离液采用密度梯度离心法分离单个核细胞,置于5%CO2、37℃条件下培养,约2周后贴壁细胞铺满80%瓶底,用0.25%胰蛋白酶消化后,以5×104个/cm2细胞密度传代培养。 3.实验分组：将细胞分为两组：对照组不加VEGF；实验组加VEGF,浓度为1Ong/ml o 4.取第5代稳定生长的细胞用流式细胞仪进行免疫表型鉴定,检测EC标志CD34+CD133+和vWF+CD31+双阳性细胞的比例。 5.瑞氏染色法观察加入VEGF后细胞形态的变化。 6.利用免疫荧光技术检测内皮细胞及内皮祖细胞表面标志CD34.CD133.CD31、vWF的表达情况。 7.实时荧光定量PCR法观察VEGF对EC标志性基因表达的影响。 结果： 1.原代培养7-8天后显微镜下可见贴壁生长的细胞,成纤维状,15天时细胞可融合至80%,变为形态均一的纺锤形。传代2～3次后能获得形态均一的细胞,排列呈放射状或旋涡状。 2.流式细胞仪检测结果显示：BM-MSC和UC-MSC中各存在少量EC及内皮祖细胞(EPC),经VEGF作用后,EC比例上升而EPC比例下降。 3.瑞氏染色显示加入VEGF后细胞形态发生变化,MSC的长宽比变大。 4.实时荧光定量PCR结果表明,加入VEGF后EC相关标志基因Tie-2和ecNOS等的表达均上调,其中UC-MSC对VEGF的反应更明显。 结论： 1.BM-MSC和UC-MSC中存在少量的EC及EPC。 2.加入VEGF可以提高MSC中EC的比例和细胞功能。
[Abstract]:Objective: 1. To compare the ratio of endothelial progenitor cells (EPC) and endothelial cells (EC) in human bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) and umbilical cord mesenchymal stem cells (UC-MSC). 2. To investigate the effect of vascular endothelial growth factor (VEGF) on the ratio of endothelial progenitor cell (EPC) and endothelial cell (EC) (EC) in MSC. Methods: 1.UC-MSC culture: the fresh umbilical cord was cut to 1-2mm in aseptic condition, adherent cells were isolated by grafting method and cultured in 5%O2 incubator at 37 鈩，

本文编号：2336070