大鼠肠道生物屏障对卵清蛋白致敏效应的影响

发布时间：2018-11-18 18:36

【摘要】：目的： 1.探讨肠道菌群对卵清蛋白致敏效应的影响。 2.研究肠道菌群紊乱与食物过敏发生的先后顺序。 3.研究双歧杆菌对食物过敏的预防和治疗作用。 方法： 构建棕色挪威大鼠(Brown-Norway Rat, BNRat)卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏动物模型,以卵清蛋白lmg每天连续灌胃6周,同时分别建立PBS对照组,卡那霉素破坏肠道菌群组,双歧杆菌预防组和双歧杆菌治疗组；每周剪尾尖取血动态检测血清中OVA特异性IgE水平和IgG水平,以IgE水平高于对照组X+3S为致敏判断标准；同时每周用代谢笼无菌操作收集大鼠粪便,检测粪便菌落总数,及采用相对荧光定量PCR方法分别检测双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的mRNA表达水平；6周后处死大鼠取回肠下段组织,分别通过光镜、电镜、免疫组化方法观察各组肠粘膜完整情况、炎症反应情况,及CD4+T细胞和CD8+T细胞数量变化。 结果： 1.致敏情况：OVA组和卡那霉素组各有4只大鼠致敏,致敏率为57%；双歧杆菌预防组和双歧杆菌治疗组各有1只大鼠致敏,致敏率为14%。 2.OVA特异性IgG抗体检测：重复测量资料的方差分析结果显示,处理因素和时间之间存在交互作用。第二周PBS组、双歧杆菌预防组的OVA特异性IgG水平分别同OVA组间均存在统计学差异,P0.05。第四周PBS组、双歧杆菌预防组的OVA特异性IgG水平分别与OVA组间差异有统计学意义,P0.05；卡那霉素组分别和OVA组、双歧杆菌治疗组间差异有统计学意义,P0.05。第六周PBS组、双歧杆菌预防组的OVA特异性IgG水平分别同OVA组间差异有统计学意义,P0.05；卡那霉素组和双歧杆菌治疗组间差异有统计学意义,P0.05。 3.CD4+T细胞和CD8+T细胞免疫组化结果：OVA组、卡那霉素组、双歧杆菌预防组和治疗组的CD4+T细胞和CD8+T细胞数量均较PBS组少,其中,双歧杆菌预防组和治疗组CD4+T细胞和CD8+T细胞数量较OVA组和卡那霉素组增多。 4.粪便菌落总数检测结果：重复测量资料的方差分析结果显示,处理因素和时间之间存在交互作用。第一周PBS组、OVA组分别同卡那霉素组间存在统计学差异,P0.05; OVA组同双歧杆菌预防组间差异有统计学意义,P0.05。第二周PBS组同其余四组间均存在统计学差异,P0.05。第三周各组间均无统计学差异。第四周PBS组和OVA组分别于卡那霉素组间差异有统计学意义,P0.05。第五周PBS组同双歧杆菌预防组间差异有统计学意义,P0.05。第六周双歧杆菌预防组分别同PBS组、OVA组间差异有统计学意义,P0.05。 5.双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的相对荧光定量PCR结果：双歧杆菌能够抑制肠道中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等致病菌的mRNA表达水平,提高双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌的mRNA表达水平,OVA对肠道菌群的表达能够产生一定影响。 6.各组回肠下段HE染色光镜结果：PBS组、双歧杆菌预防组肠道绒毛完整,未见粘膜上皮细胞损伤；治疗组偶可见粘膜上皮细胞损伤,绒毛水肿；OVA组和卡那霉素组小肠绒毛大部分剥脱,绒毛上皮细胞出现局灶性坏死,粘膜绒毛水肿、溃疡。 7.PBS组、OVA组和双歧杆菌预防组回肠下段电镜结果：PBS组和双歧杆菌预防组肠绒毛整齐完整,OVA组肠绒毛有缺损剥脱现象；PBS组肠粘膜紧密连接结构严密, OVA组可见紧密连接明显扩大,双歧杆菌预防组紧密连接结构较PBS组松散。 结论： 1.食物过敏发生前,肠道菌群紊乱已经存在。 2.双歧杆菌具有预防和治疗食物过敏的作用。 3.OVA能够导致小肠粘膜CD4+T细胞和CD8+T细胞数量减少,能够对肠道菌群产生一定影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R371

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本文编号：2340819