【摘要】：目的:研究白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因DNA疫苗与梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)Tp92抗原编码基因DNA疫苗用壳聚糖纳米颗粒(chitosan nanoparticles,CS)包裹联合免疫新西兰兔后免疫应答效应以及对新西兰兔的感染后的保护作用。 方法:定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Tp92和pcDNA3.1(+)/IL-2;用CS纳米颗粒包裹后肌肉多点注射联合免疫新西兰兔,每隔2w加强一次共3次,并于初次免疫后第8w每组随机取3只兔无菌分离脾细胞培养,MTT法检测兔脾淋巴细胞增殖水平,ELISA试剂盒检测脾细胞培养上清IL-2及IFN-γ诱导水平;第10w各实验组兔皮下接种TpNichols标准株进行皮肤感染实验,观察记录感染早期各实验组及对照组皮损的变化情况,在免疫及感染期间不同时间点分别采用ELISA检测免疫兔特异性Tp92抗体产生水平,MTT法检测兔脾淋巴细胞增殖水平。同时在感染后0-48d期间每隔3d观察记录感染部位皮损Tp阳性率及溃疡病灶发生率。 结果: 1.构建的真核重组质粒pcDNA3.1(+)/Tp92和pcDNA3.1(+)/IL-2经酶切和测序鉴定证实插入片段为目的基因,测序结果与Genbank上登录序列完全一致;均能在HeLa细胞内有效表达靶蛋白。 2. pcD/IL-2基因佐剂的联合使用对pcD/Tp92疫苗在兔体内诱生Tp92特异性抗体有显著促进作用(P0.05);CS对pcD/Tp92疫苗的包裹对诱生Tp92特异性抗体有显著促进作用(P0.05)。 3.pcD/IL-2基因佐剂的联合使用对pcD/Tp92疫苗在兔体内促进IL-2及IFN-γ分泌有着显著的加强作用(P0.05);CS纳米颗粒对pcD/Tp92疫苗的包裹并未能显著促进IL-2及IFN-γ的分泌(P0.05)。 4. pcD/IL-2基因佐剂的联合使用对pcD/Tp92在兔体内促进T细胞增殖分化有着明显的加强作用;CS纳米颗粒包裹核酸疫苗后较相应未包裹核酸疫苗组并未能显著促进T细胞增殖分化。 5. Tp的兔皮肤感染导致感染期内各对照组Tp92特异性抗体水平有着显著升高,对各疫苗组Tp92特异性抗体水平产生有一定刺激作用;pcD/IL-2基因佐剂对pcD/Tp92在感染期兔体内Tp92特异性抗体水平的长久促进及维持有显著作用,而CS纳米颗粒的包裹对pcD/Tp92在感染期后阶段兔体内Tp92特异性抗体水平的长久促进及维持无显著作用。 6. Tp的兔皮肤感染导致感染期内各对照组脾细胞的增殖分化有着显著升高,对疫苗组脾细胞的增殖分化有一定促进;pcD/IL-2基因佐剂的联合使用对pcD/Tp92在感染期兔体内脾细胞的增殖水平的长久促进及维持的有显著作用,而CS纳米颗粒的包裹对pcD/Tp92在感染期兔体内脾细胞的增殖水平的长久促进及维持无显著作用。 7.各疫苗相比各对照组均能显著降低Tp感染部位皮损Tp阳性率及溃疡病灶形成率,显示出较强的免疫保护效应;pcD/IL-2基因佐剂较之CS纳米颗粒更能增强pCD/Tp92疫苗的免疫保护效果;两者联合使用可达到较之其它疫苗组更好的免疫效果。 8.在各实验组兔背部皮肤8个位点皮内Tp感染后21d同比观察比较,用CS+pCD/Tp92+pcD/IL-2联合疫苗和pCD/Tp92+pcD/IL-2联合疫苗免疫兔后感染位点皮损红肿相对其它实验组直径最小,溃疡形成率最少;PcD/Tp92和CS+pcD/Tp92疫苗组兔后感染位点皮损皮损红肿直径同比中等大小;各对照组(CS+pcD,pcD,CS+PBS,PBS对照组)感染位点皮损红肿直径最大,溃疡病灶形成数最多。 9.各疫苗组皮损变化情况相比较显示CS+pCD/Tp92+pcD/IL-2联合疫苗组的兔感染位点皮损红肿初期最大(4.5mm),在顶峰期红肿直径最小(10mm),红肿消退的时间也最短(42d);pCD/Tp92疫苗组皮损红肿早期最小(2mm),但顶峰期红肿直径最大(12mm),红肿消退的时间也最长(48d)。 结论: 1 . CS+pcD/Tp92+pcD/IL-2联合疫苗, pcD/Tp92+pcD/IL-2联合疫苗,CS+pcD/Tp92疫苗及pcD/Tp92疫苗组经肌肉注射均可诱生较强的体液免疫和细胞免疫应答。 2.pcD/IL-2基因佐剂可以显著加强pcD/Tp92疫苗长期稳定的高抗体水平及高脾细胞增殖分化水平。 3.CS纳米颗粒对pcD/Tp92疫苗的包裹的免疫效应只在免疫后一段时间有显著的高抗体水平及高脾细胞增殖分化水平效应,不能长久维持。 4.pcD/IL-2基因佐剂和CS纳米颗粒的联合使用对pcD/Tp92疫苗的抗Tp皮肤感染的保护性效应达到最佳。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392
【参考文献】
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2366179
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