【摘要】：目的采用卵白蛋白(OVA)致敏雾化吸入激发复制实验兔哮喘模型,用白毛黑眼兔(WHBE兔)与日本大耳白兔比较,探讨WHBE兔对OVA刺激的敏感性和相关基因在哮喘模型中的表达变化,丰富哮喘疾病模型,为建立与环境因素相关的疾病模型和制备抗体的应用研究,进而有利于中医药研究哮喘的发病机制和防治提供实验依据。 方法(1)实验兔哮喘模型的建立及其评价：取体重为1.6-2.0kg的雄性WHBE兔和JW兔各24只,按体重随机各分为两组：正常组8只和模型组16只。模型组于第1天、第8天腹腔和皮下注射2mL致敏液(含4mg OVA,200mg氢氧化铝),第15天开始雾化吸入1%OVA激发,模型雾化3d组连续雾化3d,即第18天处死。模型雾化7d组连续雾化7d,即第22天处死。正常组以生理盐水按照相同的方法处理。每天观察实验兔的生理状况,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IgE、 IL-4和IFN-y的含量,进行支气管肺泡灌洗液白细胞计数,计算嗜酸性粒细胞百分率,取右侧肺组织进行病理切片HE染色观察；(2)实验兔哮喘模型中基因的表达研究：取上述各组实验兔右侧肺组织提取RNA,采用Real-time PCR法检测组织中TNF-α、 BAFF、 BAFFR和Bcl-2基因mRNA的表达水平。 结果(1)正常组实验兔无明显异常情况；与正常组相比,模型组实验兔均出现呼吸急促等类似哮喘表现,肺病理显示支气管周围有较多炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞浸润为主,符合哮喘症状的表现；且模型组后期肺病理损伤更为明显；(2)与正常组相比,WHBE兔和JW兔模型组在雾化3d和雾化7d时的支气管肺泡灌洗液中白细胞总数和嗜酸性粒细胞百分率均明显增多(P0.01)；但模型组雾化3d的嗜酸性粒细胞百分率比模型组雾化7d略高；(3)与正常组比,雾化3d后WHBE兔模型组IFN-y含量明显下降(P0.05),且IgE、 IL-4水平略有上升,而JW兔模型组则变化不明显；继续雾化至7d后,WHBE兔和JW兔模型组IgE、 IL-4水平明显升高(P0.05,P0.01),且IFN-γ含量显著降低(P0.05,P0.01)；另外,雾化3d后WHBE兔模型组IFN-γ/IL-4比值明显低于正常组(P0.05),而JW兔模型组IFN-γ/IL-4比值则降低不明显；继续雾化7d时,WHBE兔和JW兔模型组IFN-γ/IL-4比值均显著降低(P0.05,P0.01)；与JW兔组比较,WHBE兔模型组IFN-γ/IL-4比值降低程度均高于同一时期的JW兔,但差异不显著；(4)与正常组相比,WHBE兔和JW兔模型组雾化3d的TNF-α、BAFF、 BAFFR基因相对表达量与正常组相比无明显变化；模型组雾化7d时,TNF-α、BAFF、 BAFFR和Bcl-2基因的相对表达量均明显升高(P0.05,P0.01)；与JW兔相比,WHBE兔模型组雾化7d的TNF-α和Bcl-2基因表达略有增加,BAFFR基因相对表达量显著高于JW兔(P0.01);(5)Pearson R相关分析显示,哮喘模型WHBE兔IgE与肺泡BALF中的白细胞总数、BAFF mRNA、 BAFFR mRNA、Bcl-2mRNA均呈显著正相关(P0.05),与IFN-γ呈显著负相关(P0.05)；且BAFFR的基因表达与肺泡BALF中的白细胞总数、IgE、 IL-4、 BAFF mRNA、 TNF-α mRNA、 Bcl-2mRNA均呈显著正相关(P001),而与IFN-γ、 IFN-γ/IL-4比值呈显著负相关(P0.01),而JW兔的BAFFR的基因表达与BALF中的白细胞总数、BAFF mRNA、 TNF-α mRNA、 Bcl-2mRNA呈显著正相关(P0.01)；与IFN-γ、 IFN-γ/IL-4比值呈显著负相关(P0.05). 结论WHBE兔与日本大耳白兔相比,第1天、第8天腹腔和皮下注射2mL致敏液(含4mgOVA,200mg氢氧化铝),第15天开始雾化吸入1%OVA激发一周诱导的WHBE兔哮喘模型具有病程快且症状明显、稳定的特点,表明WHBE兔对OVA诱导较敏感,可用于建立哮喘模型。WHBE兔哮喘模型发生IFN-γ/IL-4比值降低比日本大耳白兔早而显著,提示Th1/Th2的失衡为WHBE兔哮喘气道炎症形成的重要原因之一,表明WHBE兔哮喘模型的发病机制与临床相符合；BAFFR和TNF-α在WHBE兔哮喘模型中出现高表达,且BAFFR与WHBE兔IFN-γ、 IL-4显著相关,提示BAFFR和TNF-α表达异常可能是OVA诱导WHBE兔哮喘模型严重程度区别于JW兔的关键因子。
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【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R256.12;R-332
【参考文献】
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2387514
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