结核分枝杆菌Rv1272和Rv1273蛋白的功能研究

发布时间：2019-01-05 08:53

【摘要】：目的探索结核分枝杆菌Rv1272和Rv1273基因编码蛋白与药物外排的关系及研究其物质转运功能,为探讨结核分枝杆菌耐药分子机制提供实验支持。 方法利用生物信息学方法分析Rv1272和Rv1273基因及其编码蛋白的结构,采用PCR技术扩增这两个基因,并与pMF406质粒连接构建重组质粒,测序正确后,电穿孔法将重组质粒转入耻垢分枝杆菌mc2155。同时用pMF406空质粒电转入mc2155做对照。对这两个蛋白进行亚细胞定位后,用试管法测定其对常用的九种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)。另一方面,用530nm激发光和590nm散射光,显示菌体对溴化乙锭(Ethidium bromide, EB)吸收的量,判断这两个基因是内排还是外排EB。然后构建菌株pMF-△Rv1273,进一步验证这两个基因的功能。最后通过检测菌株生长对EB的敏感性,进一步验证其功能。 结果经验证Rv1272和Rv1273为膜蛋白。通过测定发现与对照菌株相比,含有这两个基因的重组菌株对所测药物的MIC无显著性差异,未发现膜蛋白Rv1272和Rv1273在重组菌株中对所测药物的外排作用。与对照菌株相比,菌株pMF406-Rv1272对EB的吸收没有显著变化。而菌株pMF406-Rv1273 EB的吸收量远远高于对照菌株,菌株pMF-△Rv1273与对照菌株EB吸收量基本接近。在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中,含有Rv1272和Rv1273重组质粒的菌株与对照菌株相比,菌体生长均受到抑制。 结论Rv1272和Rv1273蛋白为膜蛋白,未发现其与结核分枝杆菌耐药之间的直接关系。Rv1272蛋白可能没有物质转运功能,而Rv1273蛋白可能是一个向内的物质转运泵,而且其转运依赖ATP的水解供能。
[Abstract]:Objective to explore the relationship between Rv1272 and Rv1273 gene coding protein and drug efflux of Mycobacterium tuberculosis and to study its substance transport function in order to provide experimental support for exploring the molecular mechanism of drug resistance of Mycobacterium tuberculosis. Methods the structures of Rv1272 and Rv1273 genes and their encoded proteins were analyzed by bioinformatics method. The two genes were amplified by PCR technique. The recombinant plasmids were constructed by ligation with pMF406 plasmids. Electroporation of Recombinant plasmid into Mycobacterium mc2155. At the same time, pMF406 empty plasmids were electrotransferred into mc2155 as control. After subcellular localization of the two proteins, the minimum inhibitory concentration (minimal inhibitory concentration, MIC).) of the two proteins against nine commonly used antimicrobial agents was determined by test tube method. On the other hand, 530nm excitation light and 590nm scattering light were used to show the amount of ethidium bromide (Ethidium bromide, EB) absorbed by the cell, and to determine whether the two genes were internal or external efflux EB.. The function of the two genes was further verified by constructing the strain pMF- Rv1273,. Finally, the sensitivity of strain growth to EB was tested to further verify its function. Results Rv1272 and Rv1273 were confirmed as membrane proteins. Compared with the control strains, the recombinant strains containing these two genes had no significant difference in the MIC of the drugs tested, and the efflux of the membrane proteins Rv1272 and Rv1273 to the tested drugs in the recombinant strains was not found. Compared with the control strain, the absorption of EB by strain pMF406-Rv1272 had no significant change. The absorption of pMF406-Rv1273 EB was much higher than that of the control strain, and the absorption of pMF- Rv1273 was similar to that of the control strain EB. In Escherichia coli and Mycobacterium smegmatis, the growth of the strains containing recombinant plasmids of Rv1272 and Rv1273 were inhibited compared with the control strains. Conclusion Rv1272 and Rv1273 proteins are membrane proteins, and there is no direct relationship between them and drug resistance of Mycobacterium tuberculosis. Rv1272 protein may have no substance transport function, while Rv1273 protein may be a substance transport pump. Moreover, its transport depends on the hydrolytic energy supply of ATP.
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R378.911

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 唐雅婷;刘克文;;核糖体的结构和功能研究——2009年诺贝尔化学奖解读[J];中国校外教育;2010年16期

2 周军;;微管结合蛋白功能研究获重要成果[J];科学通报;2008年12期

3 郭学群;孙海;;我国学校体育功能研究[J];科技信息;2010年33期

4 何彪;;清镇县土地生态系统功能研究[J];贵州师范大学学报(自然科学版);1993年01期

5 吴利先,黄文祥;粪肠球菌sprE基因的功能研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年10期

6 叶良均;黄邦汉;吴永辉;;学术团体在企业社会责任中的功能研究[J];学会;2008年03期

7 况守龙;胡廷章;;启动子的克隆和研究方法[J];重庆工学院学报(自然科学版);2007年01期

8 黄玉;杨波;迟小华;刘丽宏;李薇;卢学春;;真核生物启动子的研究及应用[J];生物技术通讯;2010年02期

9 张建伟;;校园媒体在大学生思想政治教育中的功能研究[J];科技信息;2010年28期

10 赵扬帆;郑宝东;;植物多酚类物质及其功能学研究进展[J];福建轻纺;2006年11期

相关会议论文 前10条

1 高翔;孔令伟;涂艳阳;金志刚;李葆明;金玫蕾;景乃禾;;脑功能新基因的筛选、鉴定及功能研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年

2 朱忠芳;;省会旅游中心城市功能研究——以福州市为例[A];中国地理学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年

3 李桂英;邢苗;胡波;;多头绒泡菌类PSTAIRE CDK蛋白的细胞内定位和功能研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年

4 张勇;李水生;刘云;刘晓春;林浩然;;鱼类Kisspeptin和GnIH基因起源、进化与功能研究[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年

5 蒲若蕾;黄威权;姬秋和;;胰腺促性腺激素释放激素(CnRH)受体的定位及功能研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

6 刘光清;赵伟;;Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒内部核糖体进入位点(IRES)元件结构与功能研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

7 高洪深;杨宏志;;工业企业投入产出分析的功能研究[A];企业发展与系统工程——中国系统工程学会第七届年会论文集[C];1992年

8 刘书逊;安华章;于益艺;李楠;陈涛涌;林乃松;王闻雅;曹雪涛;;3种新型泛素样分子的克隆、真核表达、结构分析和功能研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

9 杨德业;周希;黄晓燕;陈长曦;陈必成;龚永生;;Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能研究[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

10 王静敏;Ajit Sigh Dhauchak;蔚洪恩;吴晔;熊晖;David Colman;吴希如;姜玉武;;巨脑性白质脑病伴皮层下囊肿MLC1基因突变分析与突变功能研究[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 聂松义;我国脾脏功能研究达世界先进水平[N];中国医药报;2001年

2 刘向;基因研究：从测序转入功能研究[N];中国医药报;2004年

3 赵绍华;给孩子减肥必须“饿一饿”[N];健康时报;2007年

4 胡德荣;阿片受体功能研究有了新发现[N];保健时报;2003年

5 白毅;我国计算生物学研究取得重要进展[N];中国医药报;2007年

6 中国社会科学院研究生院二○○五届硕士毕业生 谢礼晔;微痕分析在磨制石器功能研究中的初步尝试[N];中国文物报;2005年

7 包海山;鄂尔多斯文化是开拓创新的文化[N];鄂尔多斯日报;2007年

8 记者 马德明;《衡水湖湿地生态保护与环境功能研究》通过专家评审[N];河北经济日报;2006年

9 记者　彭华;四个功能组团构成雅安城市中心[N];雅安日报;2006年

10 ;肾癌差异表达基因鉴定及功能研究[N];中国医药报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 孙照刚;传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表达、蛋白功能研究以及缺失该基因病毒的重组[D];中国农业大学;2005年

2 唐茹琦;精神分裂症相关基因的连锁不平衡分析和功能研究[D];上海交通大学;2008年

3 闾军;HPO-205与EDAG基因的克隆与功能研究[D];浙江大学;2002年

4 李明玉;硬骨鱼类IGF信号通路两个重要基因的结构和功能研究[D];中国海洋大学;2010年

5 王春杨;人前列腺癌相关基因UROC28功能的初步研究[D];第四军医大学;2004年

6 栾治东;人hGBP3和ALEX3基因的克隆及功能研究[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2003年

7 陈金中;人类RBBP10和bima3的克隆和功能研究[D];复旦大学;2004年

8 种靖慧;P2X家族受体在白血病中的异常表达及异常功能研究[D];中国协和医科大学;2010年

9 崔晓艳;马铃薯Y病毒属编码的膜相关蛋白的功能研究[D];西北农林科技大学;2010年

10 吕娟;APE1/Ref-1基因启动子区多态与肺癌和胶质瘤的遗传易感性分析及功能研究[D];复旦大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 程旭红;结核分枝杆菌Rv1272和Rv1273蛋白的功能研究[D];苏州大学;2011年

2 肖彦山;经济法基本原则及其功能研究[D];郑州大学;2001年

3 黄勇;Ecoli YggG功能与其相互作用因子研究[D];第四军医大学;2004年

4 宋清华;我国高等学校校训类型及其功能研究[D];苏州大学;2006年

5 苏改联;中文时尚杂志中语码转换的结构与功能研究[D];重庆大学;2006年

6 张小刚;H19/IGF2印迹模型中miR-483和miR-675功能研究[D];山东师范大学;2011年

7 周华;肺炎链球菌DHBPs的结构和功能研究[D];重庆医科大学;2011年

8 王亚丽;汉字部首表意功能研究[D];兰州大学;2006年

9 李封;宁波方言语气词研究[D];浙江师范大学;2009年

10 杨翠;小麦（Triticum aestivum L.）钙/钙调素依赖性蛋白激酶TaCCaMK的功能研究[D];西北农林科技大学;2010年

，

本文编号：2401545