家兔低血钾模型中骨骼肌钾离子的变化及其机制的探讨

发布时间：2019-02-09 07:47

【摘要】：目的:应用低钾饲料致家兔低血钾模型,测定家兔血浆钾离子浓度,以观察低钾程度,同时观察骨骼肌组织钾离子,钠离子,镁离子含量,细胞膜上Na,K-ATP酶活性及α1α2亚型的表达情况,探究缺钾时家兔血浆钾,骨骼肌组织内钾离子含量的变化规律,并初步探讨其变化的机制。方法:清洁级健康家兔48只,体重2.0~2.7kg、兔龄12~14周,雄性(河北医科大学实验动物中心提供),随机分为6组,每组8只,按低钾饲喂的时间分为正常对照组(A组)、低钾饮食3天组(B组)、低钾饮食6天组(C组)、低钾饮食9天组(D组)、低钾饮食12天组(E组)、低钾饮食15天组(F组)。家兔购入后先放置于安静、舒适的环境中,正常饲喂一周后开始用家兔低钾饲料饲喂,低钾饮食期间自由摄取蒸馏水。以低钾饮食开始前当天作为第0天,低钾饮食后第1天作为第1天,依次类推。分别以低钾饲喂第0天,第3天,第6天,第9天,第12天,第15天作为终点处死动物并留取相应标本。标本处理当天先取出家兔称重,记录体重变化情况,后置于安静环境下2小时。4%戊巴比妥于耳缘静脉注射1ml/kg,麻醉后,迅速剪去家兔右下肢兔毛,以75%的乙醇溶液消毒右下肢,用大剪刀剪开其右下肢皮肤,分离筋膜,分别暴露分离比目鱼肌和股静脉。先由股静脉留取血液样本2ml,应用离子选择电极法测定血浆钾离子浓度,后取比目鱼肌约2g,去除肌肉上的筋膜组织,准确称重,用预冷生理盐水冲洗比目鱼肌组织,取滤纸反复吸干,放入标记好的冻融管,迅速置于液氮罐中冷冻保存。用以测定Na,K-ATP酶活性,取材结束-70℃冰箱保存。比目鱼肌Na,K-ATP酶活性按照考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒,检测总蛋白含量后用超微量ATP酶测试盒检测Na,K-ATP酶活性。取比目鱼肌约35mg,去除肌肉上的筋膜组织,用预冷等渗氯化锂冲洗,取滤纸反复吸干,准确称重,-20℃保存。采用火焰原子吸收光度计测定骨骼肌组织内钾离子,钠离子,镁离子含量。取比目鱼肌约500-600 mg,去除肌肉上的筋膜组织,用预冷生理盐水冲洗比目鱼肌组织,取滤纸反复吸干,放入冻融管,标上标签,迅速置于液氮罐中冷冻保存,取材结束-70℃冰箱保存。采用Western blot测定A组D组F组比目鱼肌Na,K-ATP酶α1,α2亚型表达。所有数据通过spss13.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差( X±s)表示,组间比较采用单因素方差分析。结果: 1家兔低钾饮食前后体重比较无统计学意义。 2低钾饮食3天后即可观察到血浆钾离子下降(P0.05),血浆钾离子随低钾饮食天数增加而逐渐下降。 3低钾饮食3天后,观察比目鱼肌组织内钾离子含量与A组相比开始降低(P0.05),且随着低钾饮食天数增加,比目鱼肌组织内钾离子含量逐渐降低。 4低钾饮食3天后,观察比目鱼肌组织内钠离子含量与A组相比增加(P0.05),且随着低钾饮食天数增加,比目鱼肌组织内钠离子含量逐渐增高。F组比目鱼肌组织内镁离子含量相对A组降低(P0.05)。 5低钾饮食3天后,可观察到比目鱼肌Na,K-ATP酶活性下降(P0.05),且随着低钾饮食天数增加,比目鱼肌Na,K-ATP酶活性降低。 6 D组比目鱼肌Na,K-ATP酶α1亚型表达较A组无统计学差异,F组相对A组降低(P0.05),D组α2亚型表达相对A组降低(P0.05),F组相对A组显著降低。结论:低钾饮食可造成比目鱼肌组织内钾离子含量降低,比目鱼肌组织内钠离子显著增高,镁离子含量降低。比目鱼肌Na,K-ATP酶活性随血浆钾离子下降而下降,低钾饮食期间比目鱼肌Na,K-ATP酶α_1亚型表达有降低趋势,α_2亚型表达随着血浆钾的降低而降低。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R-332

【参考文献】