SM22α在血管紧张素-Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞收缩中的作用及机制

发布时间：2019-02-19 17:41

【摘要】：目的:血管紧张素-Ⅱ(angiotensin-Ⅱ, Ang-Ⅱ)是一种血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)收缩兴奋剂。SM22α是一种actin结合蛋白,仅表达于收缩型的VSMCs中。SM22α是否参与Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩,尚不清楚。体外培养的VSMCs已发生表型转化,由收缩型转变为合成型,失去收缩能力。本研究用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导培养的VSMCs再分化,采用RNA干扰技术,敲低内源性SM22α表达,观察SM22α在Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩中的作用,并探讨其作用机制。 方法与结果: 1 ATRA诱导体外培养的VSMCs再分化 SM22α和SM-α-actin的表达是分化型VSMCs的重要分子标志。ATRA诱导40 h后,与正常培养(10% FBS)的VSMCs相比,SM-α-actin和SM22α的表达明显上调,说明ATRA可诱导VSMCs再分化。 2再分化的VSMCs对Ang-Ⅱ刺激产生收缩应答 用Ang-Ⅱ(0.1μM)刺激常规培养和ATRA处理40 h的VSMCs,细胞的收缩能力明显不同。再分化的VSMCs的收缩指数(0.28±0.019)显著高于对照组(0.06±0.01)(P0.05)。 3 SM22α参与Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩 使用RNA干扰技术敲低内源性SM22α的表达后,观察对Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩的影响。结果显示,敲低组的细胞收缩指数(0.11±0.015)低于对照组(0.29±0.021),两组之间有显著差异(P0.05)。提示Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩依赖于SM22α。 4 Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩依赖于ERK通路的活化 Ang-Ⅱ刺激导致ERK的磷酸化活化。用PD98059(10μM)(ERK上游激酶MEK抑制剂)抑制ERK的激活,Ang-Ⅱ诱导的细胞收缩减弱,收缩指数(0.13±0.012)显著低于对照组(0.26±0.023)(P0.05)。上述结果提示,ERK信号通路介导Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩。 5 SM22α参与Ang-Ⅱ诱导的ERK活化 用siRNA敲低内源性SM22α表达,观察对Ang-Ⅱ诱导的ERK活化的影响。Western blot分析表明,Ang-Ⅱ刺激后,对照组及SM22α敲低组的ERK磷酸化水平均有升高,但SM22α敲低组的上升幅度显著低于对照组。 6 SM22α参与actin应力纤维的形成 细胞免疫荧光染色结果显示,ATRA处理的细胞,其SM22α表达量丰富,应力纤维呈束状,排列规则,SM22α与应力纤维共定位。而SM22α敲低组的应力纤维稀疏,在胞浆散在分布。以上结果说明,SM22α在应力纤维形成过程中起重要作用。 结论: 1 ATRA诱导体外培养的VSMCs再分化,并重新获得收缩能力。 2 SM22α参与Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩。 3 SM22α通过促进actin应力纤维的形成,调节ERK的活化,从而影响Ang-Ⅱ诱导的VSMC收缩。
[Abstract]:Objective: angiotensin- 鈪，

本文编号：2426717