沙眼衣原体Ahpc蛋白的原核表达、纯化及活性分析

发布时间：2019-02-24 20:25

【摘要】：本研究根据Ct Ahpc基因序列设计特异性引物,以Ct DNA为模版PCR扩增Ahpc基因到大小为585 bp,将其连接到p ET28a获得重组质粒p ET28a-Ahpc,将该质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌BL/p ET28a-Ahpc,利用IPTG诱导重组Ahpc蛋白表达,目的蛋白分子量大小约为26 k D。利用Ni-NAT亲和层析法纯化得到的重组Ahpc蛋白。氧化铁二甲酚橙法检测发现Ahpc蛋白能够分解双氧水和叔丁基过氧化氢,具有分解过氧化合物的活性。测定重组大肠杆菌在百草枯所致氧化胁迫下的生长曲线,发现表达Ahpc蛋白的重组菌的生长情况比对照好。本研究成功表达和纯化得到沙眼衣原体Ahpc蛋白并测定其活性,为解析沙眼衣原体的抗氧化机制提供实验证据。
[Abstract]:In this study, specific primers were designed according to the sequence of Ct Ahpc gene. Ahpc gene was amplified with Ct DNA as template PCR and ligated to p ET28a to obtain recombinant plasmid p ET28a-Ahpc,. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and the recombinant strain BL/p ET28a-Ahpc, was used to induce the expression of recombinant Ahpc protein. The molecular weight of the target protein was about 26kD. The recombinant Ahpc protein was purified by Ni-NAT affinity chromatography. Iron oxide xylenol orange assay showed that Ahpc protein could decompose hydrogen peroxide and tert-Ding Ji hydrogen peroxide and had the activity of decomposing peroxy compounds. The growth curve of recombinant Escherichia coli under oxidative stress induced by paraquat was determined. It was found that the growth of recombinant Escherichia coli expressing Ahpc protein was better than that of control. In this study, chlamydia trachomatis Ahpc protein was successfully expressed and purified, and its activity was determined, which provided experimental evidence for elucidating the antioxidation mechanism of chlamydia trachomatis.
【作者单位】： 南华大学病原生物学研究所;湖南省分子靶标新药研究协同创新中心;邵阳学院附属医院检验科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81102230;31470277) 特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(湘科计字[2014]5号) 湖南省高校创新平台开放基金(No.13K081) 湖南省科技计划项目(No.2015JC3087) 衡阳市科技局项目(2015KS11)共同资助
【分类号】：R374.1

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本文编号：2429900