绿色荧光裸鼠的培育及其胶质瘤模型的建立

发布时间：2019-03-15 21:43

【摘要】：脑胶质瘤的研究高度依赖于可靠的动物模型,可靠的动物模型为从不同角度研究脑胶质瘤在体内发生及发展过程提供了可能。体外研究使我们不能阐明肿瘤和宿主之间复杂的相互作用。当在活体动物体内建立异种移植的脑胶质瘤模型时,为了防止排斥反应,实验动物必须是免疫缺陷动物。免疫缺陷鼠,例如裸鼠及NOD/SCID鼠目前广泛应用于脑胶质瘤体内模型。本研究我们利用表达EGFP基因的C57BL/6J-EGFP转基因小鼠与nu/nu裸小鼠杂交培育绿色荧光裸鼠,利用绿色荧光裸鼠建立脑胶质瘤动物模型,初步探索肿瘤血管的生成、来源及3.0T MR在肿瘤动物模型中应用的可行性。 本课题从两个方面对人脑胶质瘤绿色荧光裸鼠模型进行研究：①绿色荧光裸鼠的培育②胶质瘤绿色荧光裸鼠模型的建立。 第一部分绿色荧光裸鼠的培育 目的培育表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转基因裸小鼠,为胶质瘤动物模型的建立和临床治疗的实验性研究提供实验动物。 方法将C57BL/6J-EGFP转基因小鼠与nu/nu裸小鼠(遗传背景为BALB/c)进行交配,在继代时严格挑选都表达EGFP基因的无毛雄鼠(♂)与有毛母鼠(♀)交配,通过肉眼、荧光显微镜和分子生物学等方法观察EGFP基因在裸小鼠全身各组织中的表达情况。 结果传至F18代的仔鼠,通过小动物活体成像系统出生后2天就可鉴别其是否表达EGFP基因,出生后4周肉眼就可以鉴别是否表达裸基因；绿色荧光裸鼠大体解剖无胸腺,器官及组织冰冻切片荧光显微镜下观察均见有绿色荧光；裸鼠EGFP基因PCR结果表明脑组织、皮下肌肉、鼠尾和脚趾全部表达EGFP基因。 结论通过将C57BL/6J-EGFP转基因小鼠与nu/nu裸小鼠进行杂交能培育出表达EGFP基因的裸小鼠；鼠尾EGFP基因的鉴定,在不处死鼠的情况下提供EGFP基因表达的分子生物学证据,既精确可信,又能体现对实验动物的人文关怀；本实验培育的绿色荧光裸鼠为肿瘤模型的建立提供了一个新的实验动物。 目的建立可重复性、稳定的SHG-44胶质瘤绿色荧光裸鼠脑内及皮下模型,初步探索肿瘤血管的生成、来源及3.0T MR在肿瘤动物模型中应用的可行性。 方法用立体定向仪将人脑胶质瘤细胞系SHG-44注射于绿色荧光裸鼠的脑内制成肿瘤的原位模型,用1ml注射器将SHG-44注射于绿色荧光裸鼠的前肢腋部皮下制成肿瘤的皮下模型,脑内模型经常规HE和免疫组织化学染色,用普通光镜和荧光显微镜观察移植瘤的形态特征、侵袭播散情况及肿瘤血管的来源；脑内模型及皮下模型术后第25天观察3.0T MRI扫描特征并与病理学检查结果相比较。 结果脑内模型除去围手术期死亡1只裸鼠外,剩余9只术后第25天处死裸鼠,常规HE检查均见有肿瘤生长,成瘤率达100%；脑内模型的瘤细胞依然具有人脑胶质瘤的基本特征,肿瘤血管在荧光显微镜下观察到强烈的绿色荧光；脑内模型及皮下模型3.0T MRI扫描均见有肿瘤生长,扫描图像清晰并与病理检查结果相一致。 结论绿色荧光裸鼠可用于肿瘤移植实验并可用颜色来鉴别肿瘤血管,对肿瘤血管的生成和来源的研究有重要意义；3.0T MRI可用于观察人脑胶质瘤模型肿瘤的生长。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R-332

【参考文献】

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本文编号：2441011