长期培养人脐带间充质干细胞活性及基因表达变化研究

发布时间：2019-03-19 20:37

【摘要】：目的：探讨体外长期培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-MSCs, hUC-MSCs)生物活性变化特点及分子机制,为提高MSCs体外长期培养的质量与稳定性提供实验资料。 方法：无菌收集剖宫产新生儿脐带,经胶原酶Ⅱ消化,分离细胞。采用粘附生长选择法体外纯化hUC-MSCs,并通过胰酶消化传代、扩增hUC-MSCs。取第3代细胞进行流式分析,脂肪和成骨诱导鉴定；收集不同代的细胞分别用MTT法、流式细胞术和爬片技术检测细胞增殖活性、细胞周期、细胞凋亡率和细胞粘附能力。利用荧光定量PCR对不同代细胞的IL-6、IL-11、PCNA、Galectin-3等基因表达情况进行动态监测,同时用Westernblot免疫印记分析Galectin-3蛋白的表达,ELISA法检测IL-6、IL-11分泌情况。 结果：本实验分离制备的细胞表型为CD105+/CD29+/CD44+/CD31-/CD34-/CD45-/HLA-DR-,可诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞是典型的hUC-MSCs。传代培养第3至23代细胞形态无明显变化,细胞的生长曲线基本一致,第28代后细胞增长缓慢。第33代细胞较第3代细胞G0/G1减少17.9%、S+G2/M增加103.4%、细胞凋亡率增加316.7%,差异均有显著的统计学意义(P0.01)；第3至第18代细胞间G0/G1、S+G2/M、细胞凋亡率和粘附细胞数差异均无统计学意义(P0.05)。第33代的IL-6、IL-11、PCNA基因表达相对量分别是第3代的0.44,0.63,0.67倍,差异均有显著的统计学意义(P0.01)；第33代的Galectin-3基因表达相对量是第3代的0.97倍,差异无统计学意义(P0.05)。第33代细胞培养上清液中IL-6、IL-11较第3代分别减少了50.2%和59.3%,而Galectin-3无明显差异。 结论：在体外长期培养环境中,随着传代次数的递增,(?)UC-MSCs的增殖及粘附能力下降,细胞凋亡率增加,产生IL-6和IL-11的能力逐渐减弱,而Galectin-3的生成无明显改变,总的生物活性呈逐渐下降趋势,其最佳生物活性期出现在培养第3至18代之间。
[Abstract]:Aim: to investigate the biological activity changes and molecular mechanisms of human umbilical cord mesenchymal stem cells (human umbilical cord-MSCs, hUC-MSCs) cultured in vitro in order to provide experimental data for improving the quality and stability of long-term culture of human umbilical cord mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. Methods: the umbilical cord of caesarean section newborn was collected aseptically and digested by collagenase 鈪，

本文编号：2443876