麦胚无细胞蛋白合成系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白的研究

发布时间：2019-04-22 15:45

【摘要】：疟原虫环子孢子蛋白(CSP)蛋白是平均分布在疟原虫子孢子上的一层表被蛋白,是恶性疟原虫子孢子时期的重要保护性抗原,也是疟疾疫苗研究中的重要候选抗原之一。然而因该蛋白结构复杂,至今尚无合适的蛋白合成系统表达和制备出理想的重组CSP作为疟疾疫苗应用。麦胚无细胞蛋白合成系统属于无细胞合成系统中的真核蛋白合成系统,是不同于基于细胞的蛋白合成系统的一种新的蛋白合成体系,可克服迄今其他各种基因工程蛋白合成技术所存在的缺点,国外已有学者在进行使用麦胚无细胞蛋白合成系统表达疟原虫蛋白的研究,已有文献支持该系统在疟原虫蛋白的表达上具有独有的优越性,所以本课题运用该系统合成恶性疟原虫CSP,以探讨其作为疟疾疫苗的可行性和为新型疟疾疫苗研究建立基础。 目的:应用麦胚无细胞蛋白合成系统表达出具有生物活性的恶性疟原虫CS蛋白。 方法:依据PlasmoDB上查得的恶性虐原虫Pf3D7株CSP基因序列,设计一对引物,经PCR扩增出CSP基因全序列。用NcoI与SmaI DNA内切酶双酶切PCR产物后,与同样双酶切的pIVEX 1.3WG载体连接,转化大肠杆菌DH5а株,获得pIVEX WG 1.3-CSP表达质粒。常规方法对质粒进行鉴定和DNA测序分析。将pIVEX WG 1.3-CSP质粒加入到麦胚无细胞蛋白合成系统进行表达,优化不同表达条件,对表达产物进行原虫蛋白部分性状鉴定与分析。 结果:PCR成功扩增出CSP基因序列;成功构建了用于麦胚无细胞系统的pIVEX WG 1.3-CSP真核表达质粒;该重组质粒在麦胚无细胞蛋白合成系统中成功地表达出了重组恶性疟原虫CS蛋白,经鉴定,表达产物的可溶性为100%; 结论:使用麦胚无细胞蛋白合成系统能够表达出完全可溶的重组CS蛋白。但关于无细胞系统表达的疟疾重组蛋白质的纯化问题,尚需要进一步的研究。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

【参考文献】

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1 井健;;使用无细胞翻译体系合成尿激酶原突变体蛋白[J];北京师范大学学报(自然科学版);2008年02期

2 潘卫庆;疟疾疫苗研究的现状和展望[J];第二军医大学学报;2004年01期

3 张性益;;我国疟疾现状及防治[J];应用预防医学;2008年S2期

4 程远国;恶性疟对喹啉类抗疟药多药耐药现象及基因的研究进展[J];寄生虫与医学昆虫学报;1999年04期

5 彭小红;徐文岳;付雍;丁艳;黄复生;;主动入侵的疟原虫子孢子通过CSP蛋白诱导DC成熟[J];免疫学杂志;2010年04期

6 肖丹;龙泳;王善青;;国内外疟疾疫情的研究进展[J];中国热带医学;2010年01期

7 车河龙;林栋;;疟疾的防控现状及进展[J];热带医学杂志;2010年02期

8 陈丹;胡又佳;朱春宝;;无细胞蛋白质合成系统[J];生物技术;2006年05期

9 焦岩;孟庆跃;;我国疟疾防治形势、政策干预和挑战分析[J];中国初级卫生保健;2006年01期

10 周家莲;杨恒林;;抗疟药研究现状与发展趋势[J];中国病原生物学杂志;2008年11期

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本文编号：2462964