小鼠嗜酸性细胞CCR3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2019-05-07 08:18

【摘要】：目的： 掌握小鼠嗜酸性细胞CCR3基因RNA干扰慢病毒载体的构建方法，通过慢病毒载体的构建，降低CCR3基因在嗜酸性细胞中的表达，从而为探讨阻断Eotaxin/CCR3路径对嗜酸性细胞凋亡及其在骨髓、外周血及局部组织的募集、迁移及成熟过程的机制变化影响创造条件。 方法： 利用公用网站按照RNAi序列设计原则，设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经MluI、SacⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ和XhoⅠ进行酶切后的pLVX-shRNA2-m载体连接产生shRNA慢病毒载体。应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及嗜酸性细胞细胞，，测定病毒滴度，Q-PCR鉴定CCR3基因在嗜酸性细胞中的下调作用。 结果： 成功构建了shRNA-mCCR3慢病毒载体，经测序与设计合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90%，病毒滴度为4X108TU/ml；Q-PCR测定对嗜酸性细胞CCR3基因沉默效率为86.7%。 结论： 成功构建了小鼠嗜酸性细胞CCR3基因RNAi慢病毒载体，为后续的体内外功能学试验创造了条件。
[Abstract]:Objective: to study the construction of lentivirus vector interfering with CCR3 gene RNA in mouse eosinophil cells, and to reduce the expression of CCR3 gene in eosinophil cells by constructing lentivirus vector. In order to explore the effect of blocking Eotaxin/CCR3 pathway on eosinophil apoptosis, recruitment, migration and maturation of eosinophils in bone marrow, peripheral blood and local tissues. Methods: according to the principle of RNAi sequence design, the public websites were used to design the RNAi target sequence and synthesize the Oligo DNA, annealing of the target sequence to form double-stranded DNA, and MluI,Sac 鈪

本文编号：2470913