白杨素对慢性支气管哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响以及机制探讨

发布时间：2017-03-15 21:55

  本文关键词：白杨素对慢性支气管哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响以及机制探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分白杨素对人气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究目的:探索白杨素对人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖、凋亡的影响及相关机制。方法:采用cell counting kit-8(CCK-8)法测定白杨素对HASMCs以及血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的HASMCs增殖的影响;采用流式细胞术检测白杨素和PDGF-BB单独或联合作用对HASMCs的凋亡的影响;运用Western Blot方法评价白杨素对PDGF-BB刺激后的HASMCs中ERK1/2磷酸化水平的影响。结果:白杨素(20μM,40μM)在24 h和48 h可以显著抑制HASMCs的增殖(P0.05),且呈剂量和时间依赖性。PDGF-BB(10 ng/m L)可显著促进HASMCs增殖(P0.05),而白杨素(10μM,20μM,40μM)在24 h和48h均明显抑制PDGF-BB诱导的HASMCs增殖(P0.05),也呈现一定的剂量和时间依赖关系。PDGF-BB(10 ng/ml)和白杨素(20μM)对HASMCs凋亡无明显影响。白杨素(20μM)对HASMCs中ERK1/2基础状态的磷酸化水平没有明显影响,但是可以明显抑制PDGF-BB(10 ng/ml)诱导的ERK1/2磷酸化水平上升(P0.05)。结论:白杨素可以抑制基础状态以及PDGF-BB诱导下HASMCs的增殖;白杨素抑制PDGF-BB诱导的细胞增殖可能是通过降低细胞内ERK1/2磷酸化水平发挥作用。第二部分白杨素对慢性支气管哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响目的:探索白杨素对慢性支气管哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响及相关机制。方法:48只雌性BALB/c小鼠按照随机原则分为对照组、哮喘组、地塞米松组和白杨素组,每组12只。第0、14天,腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏;第21天开始,1%OVA雾化30 min,每周3次,共8周。第21天开始,白杨素组小鼠给予白杨素(100 mg/kg)灌胃,每日一次,共8周;地塞米松组小鼠给予地塞米松(2 mg/kg)腹腔注射,每次雾化前30 min注射,每周三次,共8周。末次激发24 h后,使用小鼠肺功能仪进行气道反应性测定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、IL-13及血清中总Ig E水平。取肺组织病理石蜡切片行苏木精-伊红(HE)染色,观察肺组织炎症浸润情况,PAS染色观察杯状细胞增生程度,免疫组化半定量法检测气道α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的表达。运用Western Blot方法检测小鼠肺组织中Akt、p-Akt、ERK、p-ERK蛋白表达水平。结果:肺功能检测发现各组小鼠的肺阻力(RL)基础值无明显差异;应用氯化乙酰胆碱(Ach)进行激发时,随浓度增加,对照组RL轻度增加,哮喘组RL显著增加;当氯化乙酰胆碱浓度在3.125 mg/m L及更高浓度时,哮喘组气道阻力较对照组明显增加(P0.05);当氯化乙酰胆碱剂量在6.25 mg/m L及更高浓度时,地塞米松组和白杨素组气道阻力较哮喘组显著降低(P0.05)。哮喘组小鼠BALF中总炎症细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞较对照组显著增加(P0.05);地塞米松组和白杨素组小鼠BALF中总炎症细胞数和各类炎症细胞数均较哮喘组明显减少(P0.05)。哮喘组小鼠BALF中IL-4和IL-13 较对照组明显升高(P0.05);地塞米松组和白杨素组小鼠BALF中两者水平均较哮喘组明显降低(P0.05)。哮喘组总Ig E在血清中的表达较对照组明显升高(P0.05),地塞米松组和白杨素组小鼠血清中总Ig E水平较哮喘组明显下降(P0.05)。对照组小鼠气道内PAS阳性上皮细胞极少,哮喘组小鼠与对照组相比气管壁PAS阳性上皮细胞明显增加(P0.05);地塞米松组和白杨素组与哮喘组相比杯状细胞增生显著减轻(P0.05)。对照组小鼠气道周围α-SMA染色阳性面积很小,哮喘组小鼠与对照组相比,哮喘组小鼠肺组织α-SMA染色阳性面积明显增加(P0.05);地塞米松组和白杨素组与哮喘组相比α-SMA染色阳性面积明显减少(P0.05)。正常组小鼠肺组织中Akt、ERK1/2磷酸化水平较低,在OVA致敏和激发后,哮喘组Akt、ERK1/2磷酸化水平较正常组明显增高(P0.05),地塞米松和白杨素可以显著抑制肺组织中OVA诱导的Akt、ERK1/2磷酸化增加(P0.05),各组总Akt、ERK1/2无明显变化。结论:白杨素可以在一定程度上抑制慢性支气管哮喘模型小鼠的气道高反应性、气道炎症以及气道重塑,这种作用可能与降低Akt和ERK1/2磷酸化水平有关。
【关键词】：人气道平滑肌细胞 白杨素 血小板源性生长因子 增殖 支气管哮喘 白杨素 气道高反应性 气道炎症 气道重塑
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 引言12-14
• 第一部分 白杨素对人气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究14-31
• 材料与方法14-25
• 结果25-29
• 讨论29-31
• 第二部分 白杨素对慢性支气管哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响31-51
• 材料与方法31-38
• 结果38-48
• 讨论48-51
• 小结51-52
• 参考文献52-59
• 综述59-69
• 参考文献64-69
• 附录69-72
• 攻读学位期间发表论文情况72-73
• 致谢73

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