表达鼠源GLP-2嗜酸乳杆菌的构建及其对IBD模型小鼠的影响

发布时间：2017-03-16 09:07

  本文关键词：表达鼠源GLP-2嗜酸乳杆菌的构建及其对IBD模型小鼠的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：IBD(Inflammatory bowel disease)是炎性肠病的简称,主要包括溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's Disease,CD)。能够明确IBD的发生发展机制才能有效缓解、治疗IBD。遗憾的是,目前为止的已有研究都没有明确IBD的具体发病机制。但是根据临床实践中观察总结的病理表现、检测到的各种病理因素来推断,IBD的发病机制可能与环境、遗传、免疫三方面有关。IBD病程的发展伴随肠道炎症的加剧,会出现肠上皮细胞凋亡,肠粘膜通透性增加,肠上皮屏障功能减弱,同时肠道内菌群比例失衡,致病菌增殖转移等现象,严重时甚至可能导致粘膜出血、溃疡、糜烂,最终引发癌变。益生菌可以调节病理条件下肠道菌群的比例,由此对维护肠内环境稳态有积极作用,而且对病毒和细菌诱导的肠道感染、抗生素诱导的腹泻与免疫病变有不同疗效。嗜酸乳杆菌是一种常见的肠道益生菌,它可以通过调节肠道菌群比例来维护微生态环境,抑制各种有害菌,减少了体内毒素的生成,同时分泌抗生素类物质对致病微生物产生拮抗作用。因此,嗜酸乳杆菌通过维护整个胃肠道的微生态平衡,增强肠道屏障功能,调节相关免疫反应,来维护肠道内环境稳态,在一定程度上达到了治疗IBD的作用。胰高血糖素样肽2(GLP-2)作为一种肠道营养因子,可以促进肠粘膜增殖、抑制其凋亡,从而改善肠道屏障功能,有利于肠道的吸收功能。因此,GLP-2通过刺激隐窝细胞的增殖,间接抑制黏膜上皮细胞的凋亡,增强肠道上皮屏障功能和促进肠道生长,减轻了结肠损伤的严重程度,从而有效抑制IBD的病情发展。本研究根据GLP-2与嗜酸乳杆菌对IBD的治疗作用,通过嗜酸乳杆菌表达外源目的蛋白GLP-2。将GLP-2与嗜酸乳杆菌信号肽重组连接在pMG36e质粒上,通过电转化转入感受态嗜酸乳杆菌中,构成重组嗜酸乳杆菌。结果表明,重组pMG36e质粒中扩增GLP-2基因与基因库公布的一致,并且通过Western blot检测到重组嗜酸乳杆菌上清液中有GLP-2蛋白表达,然后将成功构建的重组嗜酸乳杆菌应用到IBD小鼠模型中,通过各个生理指标的检测,表明重组嗜酸乳杆菌相比嗜酸乳杆菌对IBD的治疗效果显著增强,因为重组嗜酸乳杆菌能表达GLP-2蛋白,从而增强疗效。重组嗜酸乳杆菌的成功构建为后续研究重组益生菌应用于临床治疗IBD奠定了基础。
【关键词】：炎性肠病 胰高血糖素样肽-2 重组嗜酸乳杆菌 治疗
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574;R-332
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-10
• 第一篇 文献综述10-14
• 第二篇 研究内容14-47
• 第一章 表达鼠源GLP-2 嗜酸乳杆菌的构建及鉴定14-23
• 1.1 材料14
• 1.2 方法14-17
• 1.3 结果17-20
• 1.4 讨论20-22
• 1.5 小结22-23
• 第二章 重组质粒signal-GLP2 pMG36e在嗜酸乳杆菌中的表达检测23-30
• 2.1 材料23
• 2.2 方法23-28
• 2.3 结果28-29
• 2.4 讨论29
• 2.5 小结29-30
• 第三章 小鼠炎症性肠病（IBD）动物模型的建立30-34
• 3.1 实验动物30
• 3.2 实验试剂及配制30
• 3.3 实验方法30-31
• 3.4 结果31-32
• 3.5 讨论32-33
• 3.6 小结33-34
• 第四章 重组嗜酸乳杆菌对小鼠IBD模型的影响34-47
• 4.1 试剂及试剂配制34
• 4.2 动物分组34-35
• 4.3 TNBS诱导35
• 4.4 制作病理切片35
• 4.5 检测MPO活性35-36
• 4.6 检测炎性因子36-37
• 4.7 结果37-45
• 4.8 讨论45-46
• 4.9 小结46-47
• 结论47-48
• 参考文献48-55
• 缩写55-56
• 作者简介56-57
• 致谢57

【共引文献】

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本文编号：251573