ERK和Akt信号通路参与了晚期糖基化产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞自噬

发布时间：2019-08-16 12:25

【摘要】：背景： 晚期糖基化产物(Advanced glycation end products, AGEs)是非酶糖化反应的终末期产物,正常人随着年龄的增加,AGEs会缓慢增加,但糖尿病病人由于长期高血糖状态,导致体内糖化反应及AGEs生成加速。已有多项研究表明AGEs是引起糖尿病血管并发症的重要诱因之一。AGEs能够在糖尿病病人血管壁沉积,促进内皮细胞凋亡和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖,从而加速动脉粥样硬化的形成。自噬是一种溶酶体依赖的细胞内受损细胞器或代谢产物的降解过程,其作为细胞的防御保护机制,与细胞凋亡之间有密不可分的联系。但关于AGEs与自噬之间可能存在的病理生理关系,目前尚不清楚。本文研究以研究自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达作为衡量自噬水平的主要指标,初步研究了AGEs诱导平滑肌细胞自噬的相关机制及其在AGEs诱导平滑肌细胞增殖中的作用。为临床上防治糖尿病合并动脉粥样硬化开辟新的途径。 目的： 明确自噬机制在AGEs诱导的血管平滑肌细胞增殖过程中的作用。探讨AGEs诱导血管平滑肌细胞自噬的相关信号通路机制以及晚期糖基化产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)在其中的作用。 方法： Western Blotting检测AGEs处理大鼠血管平滑肌细胞A7R5后自噬相关蛋白LC3-Ⅱ, MAPK通路相关蛋白,Akt/mTOR通路相关蛋白,RAGE的表达,免疫荧光检测AGEs处理A7R5细胞后自噬相关蛋白LC3的表达,电镜技术检测AGEs处理A7R5细胞后自噬体的表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测平滑肌细胞的增殖,RAGE小干扰RNA (siRNA)转染前后A7R5细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达变化。 使用SPSS17.0统计软件进行分析,计量资料实验数据以x±s表示,数据录入SPSS17.0完成统计分析,两组之间比较采用配对t检验,组间比较采用one-way ANOVA。以P0.05为有统计学差异,P0.01为有显著统计学差异。 结果： AGEs处理VSMCs后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达显著上调并呈时间浓度依赖性,电镜观察到细胞内自噬体数量增加,免疫荧光观察到胞浆内出现LC3颗粒；与对照组比较,AGEs处理组平滑肌细胞增殖能力增加,自噬抑制剂3-MA预处理的AGEs组细胞增殖能力被抑制。AGEs能够激活ERK,JNK, P38的磷酸化水平,同时抑制Akt, mTOR的磷酸化水平。分别使用ERK抑制剂PD98059, JNK抑制剂SB203580, P38抑制剂SP600125, Akt激活剂IGF-1预处理后,只有PD98059预处理组和IGF-1预处理组能够抑制AGEs诱导的平滑肌细胞自噬。用RAGE-siRNA干扰A7R5细胞RAGE的表达后,AGEs诱导的平滑肌细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达增高现象被抑制。 结论： 本实验以大鼠血管平滑肌细胞系A7R5为对象,研究AGEs对血管平滑肌细胞自噬水平产生的影响。AGEs通过ERK和Akt依赖的信号通路诱导的自噬参与了AGEs诱导的血管平滑肌细胞增殖。对AGEs-RAGE-自噬通路进行调节可能是预防糖尿病病人动脉粥样硬化的潜在治疗靶点。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363.2

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本文编号：2527434