多重耐药鲍曼不动杆菌耐药、耐消毒剂基因研究及同源性分析

发布时间：2019-09-05 16:28

【摘要】：目的：明确临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因的特点，并研究其对常用消毒剂的耐受机制。方法：（1）收集2009-2011年菌株做菌种鉴定，药敏试验。（2）进行碳青霉烯酶筛选试验。（3）用OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-Q、SHV-Q、NDM-1等引物基因对抽提的基因组DNA进行扩增，检测耐药基因。（4）用脉冲场凝胶电泳对采集自呼吸监护病区的多重耐药鲍曼不动杆菌进行同源性分析。（5）NDM-1耐药基因连接PMD18-T载体。（6）观察消毒剂含氯消毒剂和醋酸氯已定对63株多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）的杀灭效果。研究MDRAB耐消毒剂机制，研究MDRAB耐消毒剂基因的表达。结果：（1）证实2009-2011年所收集的菌株为多重耐药鲍曼不动杆菌，对常用7类抗假单鲍菌药物青霉素类、头孢菌素类、氨基糖甙类、碳青霉烯类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类中的至少5类对应的抗生素同时耐药，耐药率高达99%，表现为多重耐药。（2）碳青霉烯酶筛选试验显示，耐药菌株产碳青霉烯酶，阳性率为67.7%。（3）耐药基因检测显示耐药菌株8种耐药基因阳性。对aac6耐药基因高度表达，，阳性率为93%；OXA23次之，阳性率为87.1%；qacE△1为81.2%；tnpU阳性率为78.3%；ISAab阳性率为64.9%；TEM阳性率为62.8%；SHV阳性率为21.1%；检出一株NDM-1阳性菌株。（4）3株分离自呼吸监护病区的菌株经PFGE确证相似度较高，同源性高达87%。（5）成功构建PMD18-T-NDM-1载体。（6）63株MDRAB菌株中,检测出耐消毒剂基因qacE△1-sul147株，阳性率为：74.6%。含氯消毒剂消毒浓度5000mg/L时，能杀灭所有试验菌株。当醋酸氯已定浓度为4-8mg/L时，阴性菌株即可得到抑制杀灭，最低抑菌浓度与最低杀菌浓度相差不大。当醋酸氯已定浓度大于16mg/L时对阳性菌株有抑制杀灭作用。结论：（1）MDRAB耐药机制已转变为多种耐药基因共同介导的复杂机制。（2）从呼吸监护病区分离的菌株来自同一克隆株。（3）含氯消毒剂都可杀灭耐药菌株，醋酸氯已定的杀菌效果与qacE△1-sul1基因的携带密切相关。
【图文】：

肺炎克雷伯杆菌,碳青霉烯,表型,阳性对照

会产生朝向抑苗圈内增强生长，呈矢状。本次实验采集的 114 株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌 Hodge 试验阳性株有 77 株，阳性率为 67.7%。结果见图 1图1 碳青霉烯酶表型实验结果，注：阳性对照质控菌为肺炎克雷伯杆菌ATCC BAA 一 1705；阴性对照质控菌为肺炎克雷伯杆菌 ATCC BAA 一 1706。2、引物 OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-Q、SHV-Q、NDM-1 、VIM2、IMP1 扩增结果（1）OXA-23 PCR 扩增产物目的条带分子量为 1058bp，结果显示有 99 株检出目的基因，阳性率 87.1%，部分菌株扩增结果见图 2。二、结果图 2 OXA-23 PCR 部分扩增产物图，注：M，Marker（2000、1000、750、500、250、100）；编号 53～73：均为亚胺培南耐药

肺炎克雷伯杆菌,碳青霉烯,表型,阳性率

图1 碳青霉烯酶表型实验结果，注：阳性对照质控菌为肺炎克雷伯杆菌ATCC BAA 一 1705；阴性对照质控菌为肺炎克雷伯杆菌 ATCC BAA 一 1706。2、引物 OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-QSHV-Q、NDM-1 、VIM2、IMP1 扩增结果（1）OXA-23 PCR 扩增产物目的条带分子量为 1058bp，结果显示有 99 株检目的基因，阳性率 87.1%，部分菌株扩增结果见图 2。
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R3416

【参考文献】