胎源性非粘附骨髓基质细胞特性研究

发布时间：2019-09-18 03:42

【摘要】：骨髓间充质干细胞(BMSCs)是骨髓内除造血干细胞外另一种多分化干细胞,因其具有向骨、脂肪、肌腱、神经细胞分化等多向分化能力,并且具有低免疫原性等特点,是近年的研究热点。传统培养方法是培养2-3天后弃掉未贴壁细胞,继续培养得到高粘附的BMSCs。上世纪90年代Clarke等在发现长期骨髓培养体系中发现存在非粘附贴壁并可形成集落的细胞,且细胞形态及表型特征与粘附MSCs相似,他们认为骨髓中可能存在着比MSCs更原始的基质干细胞。随后相继有许多研究也发现骨髓中非粘附干细胞的存在,Scutt A等发现前列腺素E2、forskolin及双丁酰环磷腺苷可诱导NA-MSCs向MSCs的转化,并且NA-MSCs在造血重建中起着一定作用。Zhang ZL等将正常基因来源的NA-MSCs输入受致死剂量辐照的VDR基因敲除的小鼠时发现输入NA-MSCs的小鼠血象很快恢复并可以存活,并且VDR基因在不同的组织中都有表达,表明NA-MSCs具有很强的组织修复能力。近两年来Fricke S等利用转基因小鼠模型研究发现NA-MSCs移植较单纯骨髓移植具有更迅速的造血修复能力;他们又对NA-BMSCs的基本性质做了初步研究,认为小鼠NA-MSCs可能是一个能够表达多种基质细胞表型并能够促进造血重建的混合的细胞群体,其成纤维细胞集落能力较MSCs弱,但仍能形成CFU-F,基因表达分析显示NA-BMSCs包含基质、间充质、内皮细胞及单核细胞表达,但类骨质、淋巴系、红细胞系及造血干细胞系表达量较低,将其移植入亚剂量致死量的小鼠后其组织病理结果分析显示其促进造血及器官组织修复能力远远较间充质干细胞强。 鉴于此,我们在以上研究的基础上,着重研究了胎源性非粘附骨髓基质细胞的培养及其基本性质,并研究其细胞因子的表达情况,并将其与普通方法培养的间充质干细胞做一比较,以更好的研究非粘附基质细胞的特性。 目的:探讨胎源性非粘附骨髓基质细胞(non-adherent bone marrow stromal cell,NA-BMSCs)的分离及基本特性。方法:采用反复贴壁分离的方法培养胎源性NA-BMSCs,每24h取悬浮细胞分瓶培养,共4次;采用MTT法测定第1、3、5代(P1,3,5)细胞的生长曲线,流式细胞术检测细胞周期和表面标志;并取P1细胞行体外造血集落培养,P3细胞成骨和成脂诱导培养。结果:经反复贴壁分离4次后所获细胞经培养7天后即可得到原代NA-BMSCs。NA-BMSCs细胞形态不均匀,高表达整合素及内皮细胞表面标记(均95%以上),中等量表达CD106(69%),同时也表达造血细胞标记CD34;体外具多向分化能力,可分化为成骨细胞及造血细胞,但成脂分化能力较弱。结论:经反复转移培养可以培养出胎源性NA-BMSCs,此类细胞可能是造血细胞及间充质干细胞的共同祖细胞。 目的:探讨胎源性非粘附骨髓基质细胞(NA-BMSCs)造血相关细胞因子表达情况。方法:采用荧光定量RT-PCR的方法检测胎源性NA-BMSCs第1代细胞因子TPO、EPO、G-CSF、GM-CSF、IL-3、IL-6、IL-11、SCF、FLT-3ligand mRNA的表达情况并与常规培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)做一比较。结果:与MSCs相似,NA-BMSCs表达G-CSF、GM-CSF、IL-6、IL-11、SCF、FLT-3ligand及TPO,且NA-BMSCs SCF及TPO的表达量明显高于MSCs,但NA-BMSCs不表达EPO及IL-3。结论:NA-BMSCs细胞因子的表达与常规培养的MSCs表达的造血相关细胞因子表达相当,但其干细胞因子表达更多,可能NA-BMSCs较MSCs更为原始有关。
【图文】：

NA-BMSCs 在成脂诱导分化培养三经油红 O 染色可染为红色，，表明其具；与众不同的是NA-BMSCs在体外造 rhIL-3 激发后可形成造血细胞集落增殖分化能力。 third passage of NA-BMSCs in Wright ' s s1 NA-MSCs 传到第 3 代后瑞士染色。（×1

数为静止期细胞 细胞周期分析提示传代次数增多，部分细胞进入增殖表明其多数处于静止状态，可能更为体外生长提示，接种后的潜伏期约为，详见图 7。FCM 测 P10 NA-BMS多向分化潜能 体外诱导分化显示 高折光矿物质形成，经 Von Kossa 染 NA-BMSCs 在成脂诱导分化培养三经油红 O 染色可染为红色，表明其具；与众不同的是NA-BMSCs在体外造 rhIL-3 激发后可形成造血细胞集落增殖分化能力。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 马亮亮 ,张梅;间充质干细胞的生物学特性及临床应用展望[J];陕西医学杂志;2005年11期

2 罗蔚锋;包仕尧;;应用骨髓基质细胞治疗帕金森病研究进展[J];国外医学.老年医学分册;2005年02期

3 王恒湘;郭子宽;;间充质干细胞在组织再生应用中的诸多问题[J];组织工程与重建外科杂志;2008年05期

4 沈华;沈尊理;;脐带间质干细胞的研究进展[J];中国美容医学;2007年08期

5 丁刚;刘怡;王松灵;;间充质干细胞的免疫学特性[J];北京口腔医学;2008年02期

6 范传波,艾辉胜;骨髓间充质干细胞免疫抑制作用及其机理[J];生物技术通讯;2005年04期

7 陈伏庭;章庆国;张娇;;间充质干细胞的免疫调节作用[J];江苏医药;2006年04期

8 吕春荣;叶绍辉;马月辉;顾恩妍;关伟军;;骨髓间充质干细胞及其应用[J];中国畜牧兽医;2009年04期

9 田新;袁天柱;符仁义;潘强;陈宏;;间充质干细胞的历史沿革、生物学特性与应用前景[J];现代肿瘤医学;2010年03期

10 刘建功;郭万龙;张淑贤;段志凯;;间充质干细胞在急性辐射损伤治疗中的作用综述[J];辐射研究与辐射工艺学报;2010年03期

相关会议论文 前10条

1 王巧稚;韩艺;赵宏贤;余鸿;刘广益;;当归诱导人脂肪间充质干细胞向神经细胞分化和毒性检测的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年

2 王玉红;陈光辉;;地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

3 杜凤移;王皓;杨树龙;赵绘存;杨英;杨军;;纳米纤维支架对大鼠间充质干细胞向肝细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年

4 郭勇;张西正;郭春;魏严;李瑞欣;徐晓莹;张永红;;脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化中心肌发育相关基因的表达[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年

5 朱恒;江小霞;刘元林;张毅;毛宁;;间充质干细胞选择性调节破骨细胞发育和功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

6 张颢;陶艳玲;邱林;张伯龙;马军;陈志哲;刘拥军;韩忠朝;;一种具有免疫负调节功能的人脐带源间充质干细胞[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

7 杨少光;池颖;戎丽娟;邢文;卢士红;赵钦军;马凤霞;韩忠朝;;不同来源间充质干细胞诱导分化成血管内皮细胞的比较[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

8 李杰平;孔佩艳;李佳丽;朱丽丹;孔祥敬;曾东风;刘红;王庆余;彭贤贵;陈幸华;张曦;;纯化的自体CD34+细胞联合间充质干细胞治疗难治性克隆恩病一例并文献复习[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

9 罗高兴;程文广;黄正根;贺伟峰;袁顺宗;陈希炜;吴军;;应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面的实验研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年

10 郭振兴;郑翠玲;陈振萍;董文川;杨仁池;;胚胎骨髓来源的间充质干细胞对人Th17细胞免疫调节作用的研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 王秋月　王琳;空军总医院采用间充质干细胞救治小脑萎缩[N];科技日报;2009年

2 记者 李素锋;我市首例间充质干细胞移植手术取得成功[N];临汾日报;2009年

3 王雪飞 张秀花;修复软骨 骨髓基质细胞是最佳种子[N];健康报;2004年

4 记者 王丹　通讯员 艾素;异染性脑白质营养不良治疗获突破[N];健康报;2010年

5 ;单唾液酸四己糖神经节苷脂诱导成年大鼠骨髓基质细胞成为神经前体细胞及其分化作用的研究[N];中国医药报;2003年

6 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年

7 匡远深;治脑损伤可用骨髓细胞[N];健康报;2003年

8 张泓;生物医药,2008新突破[N];北方经济时报;2008年

9 徐机玲;姜跃进;我国骨髓干细胞移植技术获突破[N];中国医药报;2003年

10 冯友根;辛伐他汀促成骨作用研究[N];中国医药报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 许贞书;人血液血管细胞生成素对骨髓基质细胞生物学作用的实验研究[D];福建医科大学;2005年

2 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年

3 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年

4 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

5 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年

6 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年

7 吴桂珠;脂肪间充质干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究[D];福建医科大学;2010年

8 熊卉;转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究[D];武汉大学;2010年

9 苗宗宁;胎盘间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石材料在骨创伤修复中的实验研究[D];苏州大学;2010年

10 梁伟;人骨髓Flk-1~+间充质干细胞抗DNA损伤物质影响作用研究[D];中国协和医科大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 章守琴;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外研究[D];昆明医学院;2010年

2 陈芳;脐带间充质干细胞修复化疗所致卵巢颗粒细胞损伤的体外实验[D];暨南大学;2010年

3 张茜真;人脐带间充质干细胞的分离、鉴定以及干细胞特异性转录因子诱导其重编程的研究[D];浙江理工大学;2010年

4 陈义;脐带间充质干细胞培养及体外重建角膜后板层的初步研究[D];暨南大学;2010年

5 唐子滨;纳米级胶原基骨材料复合自体脂肪间充质干细胞用于兔后外侧脊柱融合的实验研究[D];河北医科大学;2010年

6 齐凯;人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化初探[D];山西医科大学;2011年

7 马兰兰;不同胎龄人脐带血间充质干细胞的研究[D];中国医科大学;2010年

8 李成华;口腔黏膜间充质干细胞存在及在口腔扁平苔藓中变化的初步研究[D];第四军医大学;2010年

9 田毅;人脐带Wharton's jelly间充质干细胞的生物学特性以及其与脑肿瘤干细胞共培养的实验研究[D];郑州大学;2010年

10 张福丽;间充质干细胞治疗肺动脉高压研究进展（附肺动脉高压发病机制进展）[D];山西医科大学;2011年

本文编号：2537277