Survivin反义寡核苷酸在人胰腺癌裸鼠模型中的抑瘤作用

发布时间：2019-10-03 07:10

【摘要】：[目的]：探讨Survivin反义寡核苷酸对裸鼠荷胰腺癌的抑制作用以及与Cox-2、PTEN和CEACAM-1在胰腺癌组织中的表达及相关性。 [方法]：构建28只人胰腺癌裸鼠模型,随机分配到空白对照组、脂质体组、ASODN组和SODN组,每组7只。分别于瘤周及瘤体注射PBS,阳离子脂质体,ASODN/LiP及SODN/LiP,每2天1次,共10次。治疗结束后2天,切取瘤体,测算瘤重和抑瘤率以评价肿瘤生长情况,瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化和DNA末端原位标记法(TUNEL法)染色以评价瘤组织病理形态，，Survivin与Cox-2、PTEN、CEACAM-1的表达。应用半定量PCR方法检测Survivin与Cox-2、PTEN、CEACAM-1mRNA的表达。 [结果]： 1.裸鼠移植瘤治疗结束时,LiP组、空白对照组、SODN组、ASODN组肿瘤生长指数分别为：(6.81±2.79)%,(7.31±2.65)%,(6.70±2.06)%,(-0.58±4.27)%；LiP组、空白对照组、SODN组、ASODN组肿瘤质量均数分别为：(1.39±0.09)g,(1.44±0.08)g,(1.33±0.11)g,(0.84±0.07)g。ASODN组裸鼠肿瘤生长明显受到抑制,差异有显著性意义(P0.05)。抑瘤率测定可见ASODN组抑瘤率明显高于LiP组、空白对照组、SODN组,差异有显著性意义(P0.05)。SODN组与其他两组差异无显著性意义。 2.Survivin-ASODN转染复合物治疗后裸鼠重要脏器的组织学观察。为了解Survivin-ASODN转染复合物对裸鼠有无毒副作用,取治疗组小裸鼠心、肝、脾、肾、肺等重要脏器行常规病理检查未见明显异常。 3.裸鼠移植瘤细胞Survivin mRNA表达通过RT-PCR检测裸鼠移植瘤细胞对照组和ASODN处理组均在346bp处出现特异性的Survivin条带。ASODN组Survivin mRNA为(0.39±0.12), SODN组、LiP组和空白对照组分别为(0.57±0.14,0.62±0.15,0.68±0.09),ASODN组与空白对照组差异有显著性意义(PO.05)；SODN组Survivin mRNA表达与其他两组相比差异无显著性意义(PO.05)。RT-PCR法检测靶向抑制Survivin表达对胰腺癌细胞凋亡相关蛋白Cox-2、PTEN. CEACAM-1mRNA表达的影响：(1)Cox-2mRNA表达状况：ASODN组Cox-2mRNA表达明显低于空白对照组、LiP组及SODN组(0.53±0.27VS0.76±0.02,0.75±0.21,0.72±0.24,P0.05),SODN组Cox-2mRNA表达与其他两组相比,差异有显著性意义(PO.05)；(2)PTEN mRNA表达状况：ASODN组PTEN mRNA表达明显高于空白对照组.SODN及LiP组(1.42±0.15VS0.97±0.63,1.13±0.15,1.06±0.12,P0.05),SODN组PTEN mRNA表达与其他两组相比差异无显著性意义(PO.05)；(3)CEACAM-1mRNA表达状况：ASODN组CEACAM-1mRNA表达明显低于空白对照组、SODN及LiP组(0.50±0.22VS0.71±0.02,0.68±0.23,0.69±0.23,P0.05),SODN组CEACAM-1mRNA表达与其他两组相比,差异也有显著性意义(PO.05)。在胰腺癌组织中Survivin与Cox-2、CEACAM-1之间呈显著正性相关(r值分别为0.615,0.715,P0.02),而PTEN与Cox-2、Surviving、CEACAM-1之间呈显著负性相关(r值分别为-0.762,-0.561,-0.807,P0.02)。 4.苏木精—伊红染色显示4组瘤块标本均有移植胰腺癌的典型组织学表现。肉眼观察：肿瘤椭圆形,结节状,有包膜,表面光滑,个别瘤体表面有破溃。剖面实性,灰白色。光镜观察：癌细胞呈圆形或多边形,胞浆红染。胞核圆形,居中,核大而深染,核浆比例增大,异型性明显,核分裂像易见。ASODN组中可见成片的凋亡细胞,细胞体积缩小,胞浆固缩,LiP组、空白对照组、SODN组偶见凋亡细胞。 5.裸鼠移植瘤细胞Survivin蛋白表达Survivin蛋白在裸鼠移植瘤细胞中有高度表达。空白对照组、LiP组、SODN组与ASODN组相比较,差异有显著性意义(P0.05)；SODN组Survivin蛋白与其他两组相比,三者之间差异无显著性意义(P0.05)。免疫组化法检测靶向抑制Survivin表达对胰腺癌细胞凋亡相关蛋白Cox-2、PTEN、 CEACAM-1蛋白表达的影响：(1)Cox-2蛋白表达状况：ASODN组Cox-2蛋白表达明显低于空白对照组、LiP组及SODN组(P0.01),SODN组Cox-2蛋白表达与其他两组相比差异无显著性意义(PO.05)；(2) PTEN蛋白表达状况：ASODN组PTEN蛋白表达明显高于SODN组、空白对照组及LiP组(P0.01),SODN组PTEN蛋白表达与其他两组相比无显著性意义(P0.01)；(3)CEACAM-1蛋白表达状况：Survivin ASODN组CEACAM-1蛋白表达明显低于空白对照组、SODN及LiP组(P0.01),SODN组CEACAM-1蛋白表达与其他两组相比无显著性意义(P0.05)。 6. TUNEL法检测显示ASODN组凋亡率达(20.2±1.05)%而SODN组、空白对照组、LiP组凋亡率为(7.71±0.61)%、(4.62±0.66)%、(4.98±0.064)%。 [结论]： Survivin反义寡核苷酸可有效地抑制人胰腺癌裸鼠皮下肿瘤的生长速度,并诱导肿瘤细胞的凋亡。Survivin在抑制细胞凋亡的同时还可能引起了细胞的增殖,从而通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的双重作用来促进肿瘤的进展。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R735.9;R-332

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