TLR2对五指山小型猪主动脉内皮细胞炎症因子表达的影响

发布时间：2019-10-12 10:01

【摘要】：动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）被认为是一种慢性炎症性疾病。Toll样受体2（Toll-like receptor2, TLR2）是介导天然免疫反应中的一种模式识别受体，研究表明TLR2在AS的发生发展中起着重要的作用。已证实TLR2在动脉粥样硬化斑块处血管内皮细胞中高表达，且在血流动力学紊乱的部位高表达。AS发展中内皮细胞发生功能障碍，能产生多种细胞因子，促进AS。本实验旨在探讨TLR2在内皮细胞发生炎症反应中的作用，通过LPS和TNF-α刺激内皮细胞诱导TLR2高表达，并通过RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术沉默TLR2，观察TLR2对内皮细胞表达炎症因子的影响。【方法】采用0.1%胶原酶消化法分离3～4月龄雄性五指山小型猪的主动脉内皮细胞，并进行体外传代培养，使用LPS、TNF-α和LTA分别刺激该细胞0、6、8、12和24h，real-time PCR检测TLR2和TLR4mRNA表达水平；LPS和TNF-α预刺激内皮细胞24h后，添加LTA孵育0、6和12h，real-time PCR检测炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1和黏附分子ICAM-1的mRNA表达量及ELISA检测IL-6的分泌量。通过向内皮细胞中转染siRNA降低TLR2的表达，添加LTA孵育12h，检测内皮细胞IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的mRNA表达量。【结果】分离得到的五指山小型猪主动脉内皮细胞形态呈铺路石样，生长状态良好。经细胞表面抗原鉴定证实此细胞为血管内皮细胞。内皮细胞未受刺激时，TLR2的表达量很低；LPS和TNF-α刺激细胞6和8h后，TLR2表达量有所升高，12和24h后，TLR2的表达量明显升高（P＜0.05），而LTA刺激内皮细胞后，TLR2的表达量未升高。未受刺激时，可检测到内皮细胞中TLR4的表达，而LPS和TNF-α刺激细胞后，TLR4的表达无明显变化。LPS和TNF-α预刺激细胞24h后，TLR2表达升高并介导LTA刺激内皮细胞表达IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的mRNA水平明显升高，，且细胞分泌IL-6的量升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。通过RNAi技术沉默TLR2后，LTA刺激内皮细胞使IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1mRNA表达量降低。【结论】 1、LPS和TNF-α诱导内皮细胞TLR2的表达量升高。说明当LPS，革兰氏阴性细菌的成分感染内皮细胞，能引起TLR2表达升高；当单核"巨噬细胞分泌的炎症因子TNF-α作用于内皮细胞，促进TLR2表达升高。 2、TLR2对配体LTA应答，引起内皮细胞炎症因子表达升高，促进血管内皮损伤并启动AS。 3、TLR2基因沉默，内皮细胞中表达炎症因子的量降低，则可以通过阻断TLR2减少内皮细胞炎症反应应答。 TLR2在介导炎症因子的表达中发挥重要作用，为进一步研究TLR2在AS中的作用奠定基础。
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363

【参考文献】