肿瘤上清液激活成纤维细胞后对血管内皮生长因子-A表达影响
发布时间：2019-11-03 06:48
【摘要】：目的：检测肿瘤细胞上清液对成纤维细胞的激活的最佳浓度及最佳浓度的条件培养液激活成纤维细胞后血管内皮生长因子（VEGF-A）的表达的变化规律。 方法：用MTT法和流式细胞凋亡术测定成纤维细胞在不同浓度条件培养液中的生长变化与凋亡率。用RT-PCR， Western blot，免疫组化检测成纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与VEGF-A的表达。 结果：MTT法发现肿瘤细胞上清液与2×DMEM:F12比例为1:1时，对成纤维细胞的生长有明显的促进作用，其生长速度快于其它浓度（P＜0.05）。流式细胞凋亡术检测表明随着肿瘤细胞上清液浓度的提高，成纤维细胞的凋亡率也上升，1:1的凋亡率与1.5:1时有差异（P＜0.05）。肿瘤细胞上清液组成的条件培养基能促进成纤维细胞α-SMA与VEGF-A稳定的表达，二者在培养后第1天都开始表达，，第3天表达量达到峰值，第三天以后表达稳定。 结论：当肿瘤细胞上清液与2×DMEM:F12比例为1:1时，能有效促进成纤维细胞的生长并促使成纤维细胞向肌成纤维细胞稳定的转化。肿瘤细胞上清液能够有效稳定的激活成纤维细胞为肌成纤维细胞，成纤维细胞的激活程度影响VEGF-A的表达，二者均具有最佳的激活时间点，并且最佳时间点相一致，最佳激活点的成纤维细胞有望成为一种可用于移植的促进血管重建的细胞。
【图文】：
图 1.1 不同浓度肿瘤细胞上清液培养成纤维细胞的生长趋势#同一时间不同浓度条件培养液培养成纤维细胞 P<0.05，*同一培养液相邻时间点成纤维细胞 P<0.05Fig 1.1 Growth of Fibroblasts cultured by the different concentration of the su#indicated the group was compared with fibroblasts cultured by the differentthe supernatant under the same time,P<0.05.*indicated the group was compared with fibroblasts cultured by the same mdifferent time.,P<0.05.2.2 流式细胞仪检测成纤维细胞的凋亡随着肿瘤细胞上清液浓度的不断提高，成纤维细胞的凋亡率也随与 1:1 浓度的条件培养液培养的成纤维细胞的凋亡率比较无差异（P浓度的条件培养液培养的成纤维细胞的凋亡率与无血清的 DMEN:F的成纤维细胞的凋亡率比较无差异（P=0.221）。其余各组间均（P<0.05）见图 1.2。
图 1.2 肿瘤细胞上清液对成纤维细胞凋亡的影响a)代表各组生长于高峰期的成纤维细胞 Annexin V-FITC/PI 双染的流式检测结果（性；A2：Annexin V-FITC、PI 阳性；A3：Annexin V-FITC、PI 阴性；A4：Ann阳性）。b)代表各组总体凋亡率的数据分析。数据代表均数±标准差。1 为普通培成纤维细胞，2~5 为肿瘤细胞上清液与 2×DMEM:F12 比例分别为 0.5:1、1:1、1成的条件培养液培养的成纤维细胞，6 为完全肿瘤细胞上清液培养的成纤维细胞。凋亡率与 1 比较 P<0.05；#代表各组凋亡率与 2 或 3 比较 P<0.05。Fig 1.2 Effect of tumor cells supernatant on fibroblasts apoptosisa) :Fibroblasts dyed with Annexin V-FITC/PI(A1:PI positive;A2:PI and Annepositive; A3: PI and Annexin V-FITC negative; A4: Annexin V-FITC positive). b)data in A4. Lane 1 was apoptosis rate of the fibroblasts cultured by the normal m2~5 were apoptosis rate of the fibroblasts cultured by the different concentrsupernatant, the respectively concentration was 0.5:1, 1:1, 1.5:1, 2:1. Lane 6 was apof the fibroblasts cultured by the complete supernatant. Values represent m*indicated the group was compared with 1,P<0.05;#indicated the group was comor 3,P<0.05.2.3 RT-PCR检测α-SMA与TGF-β1的表达
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329.21
本文编号：2554958
【图文】：
图 1.1 不同浓度肿瘤细胞上清液培养成纤维细胞的生长趋势#同一时间不同浓度条件培养液培养成纤维细胞 P<0.05，*同一培养液相邻时间点成纤维细胞 P<0.05Fig 1.1 Growth of Fibroblasts cultured by the different concentration of the su#indicated the group was compared with fibroblasts cultured by the differentthe supernatant under the same time,P<0.05.*indicated the group was compared with fibroblasts cultured by the same mdifferent time.,P<0.05.2.2 流式细胞仪检测成纤维细胞的凋亡随着肿瘤细胞上清液浓度的不断提高，成纤维细胞的凋亡率也随与 1:1 浓度的条件培养液培养的成纤维细胞的凋亡率比较无差异（P浓度的条件培养液培养的成纤维细胞的凋亡率与无血清的 DMEN:F的成纤维细胞的凋亡率比较无差异（P=0.221）。其余各组间均（P<0.05）见图 1.2。
图 1.2 肿瘤细胞上清液对成纤维细胞凋亡的影响a)代表各组生长于高峰期的成纤维细胞 Annexin V-FITC/PI 双染的流式检测结果（性；A2：Annexin V-FITC、PI 阳性；A3：Annexin V-FITC、PI 阴性；A4：Ann阳性）。b)代表各组总体凋亡率的数据分析。数据代表均数±标准差。1 为普通培成纤维细胞，2~5 为肿瘤细胞上清液与 2×DMEM:F12 比例分别为 0.5:1、1:1、1成的条件培养液培养的成纤维细胞，6 为完全肿瘤细胞上清液培养的成纤维细胞。凋亡率与 1 比较 P<0.05；#代表各组凋亡率与 2 或 3 比较 P<0.05。Fig 1.2 Effect of tumor cells supernatant on fibroblasts apoptosisa) :Fibroblasts dyed with Annexin V-FITC/PI(A1:PI positive;A2:PI and Annepositive; A3: PI and Annexin V-FITC negative; A4: Annexin V-FITC positive). b)data in A4. Lane 1 was apoptosis rate of the fibroblasts cultured by the normal m2~5 were apoptosis rate of the fibroblasts cultured by the different concentrsupernatant, the respectively concentration was 0.5:1, 1:1, 1.5:1, 2:1. Lane 6 was apof the fibroblasts cultured by the complete supernatant. Values represent m*indicated the group was compared with 1,P<0.05;#indicated the group was comor 3,P<0.05.2.3 RT-PCR检测α-SMA与TGF-β1的表达
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329.21
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 刘爱军;靳俊峰;;人皮肤成纤维细胞的高效分离培养及鉴定[J];广东医学;2008年12期
本文编号：2554958
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