岩藻糖基化修复联合CD26功能阻断促进脐血造血干细胞植入及相互作用的研究

发布时间：2019-11-06 02:37

【摘要】：目的观察岩藻糖基化转移酶VI（FTVI）体外岩藻糖基化修复技术联合DiprotinA体外阻断CD26水解酶活性技术对脐血HSC归巢缺陷的作用，探讨经两种技术联合处理后的脐血HSC的植入能力，研究两种技术的修复效果及相互作用。 方法免疫磁珠分选纯化出新鲜脐血的CD34+细胞。使用FTVI体外对脐血CD34+造血干细胞（HSC)进行岩藻糖基化处理，采用流式细胞仪检测处理后的CD34+HSC表面P/E选组素配体功能基团sLex（CD162和CLA)的表达水平。使用Diprotin A体外阻断CD26水解酶活性，采用流式细胞仪检测处理后的CD34+HSC表面CD26表达水平,使用微板荧光分光光度计检测阻断后CD26酶活性。设立实验分组（空白对照组、CD34+细胞对照组、岩藻糖基化处理组、CD26酶活性阻断组、岩藻糖基化处理/CD26酶活性阻断联合处理组），建立NOD/SCID鼠造血干细胞移植模型，将新鲜分离纯化的脐血CD34+HSC经体外处理后按分组进行移植动物实验，观察移植后小鼠生存情况，使用流式细胞术检测移植后小鼠外周血中人CD45+细胞表达水平的变化至移植后6周。采用流式细胞术和微板荧光分光光度计检测两种技术之间是否存在相互作用。 结果1.体外岩藻糖基化修复技术和CD26水解酶活性阻断技术修复效果检测：脐血CD34+HSC体外行岩藻糖基化工程后，P选择素配体活性基团（处理前后分别为（75.19±1.15）%和（94.11±1.21）%，P0.05）和E选择素配体活性基团（处理前后分别为（25.01±1.00）%和（53.52±1.17）%，P0.05）表达比例均明显升高。脐血CD34+HSC体外行CD26活性阻断处理后，CD26表达无明显变化（处理前后分别为（10.92±1.52）%和（9.88±0.95）%，P0.05）但是活性基本丧失(P0.05)。 2.NOD/SCID小鼠异基因脐血移植模型建立后的植入情况和生存情况：1）植入情况从第2周开始可以检测到人CD45+细胞的表达，第2周仅联合处理组外周血中有人CD45+的细胞，为（0.45±0.78）%。第4周各组外周血均可检测出人CD45+细胞，其CD34+细胞对照组、糖基化组、CD26活性阻断组和联合处理组CD45+细胞所占比例分别为（0.73±0.22）%、（2.95±0.12）%、（3.21±0.43）%、（8.87±0.83）%。第6周各组外周血均亦可检测出人CD45+细胞，其CD34+细胞对照组、糖基化组、CD26活性阻断组和联合处理组CD45+细胞所占比例分别为（12.87±0.62）%、（29.41±0.21）%、（32.76±0.42）%、（41.07±0.32）%。2）生存情况照光后注射等体积生理盐水未行HSC移植的小鼠均在1周内全部死亡，实验组小鼠的中位生存期均超过6周。死亡高峰时间为照射后1周，移植后6周CD26活性阻断组和联合处理组生存率明显高于其他各组（生存率：CD34+细胞对照组为40%，糖基化组为40%，CD26活性阻断组为80%，联合处理组为80%，P0.05） 3.体外岩藻糖基化修复技术和CD26水解酶活性阻断技术的相互作用检测：CD26活性阻断前后脐血HSC表面P选择素配体功能基团的表达无明显变化（处理前后分别为（75.19±1.15）%和（74.01±1.27）%，P0.05）。E选择素配体功能基团的表达无明显变化（处理前后分别为（25.01±1.00）%和（25.50±1.41）%，P0.05）。岩藻糖基化工程处理前后脐血HSC表面CD26的表达（处理前后分别为（10.92±1.52）%和（10.44±1.16）%，P0.05）和活性（处理前后分别为65.34U和65.68U，P0.05）亦无明显变化。 结论1.研究发现岩藻糖基化处理和CD26活性阻断技术可以在体外成功修复和干预脐血HSC的归巢缺陷。2.体内动物实验发现两种修复技术均可提高脐血造血干细胞的植入速率和移植小鼠生存率，联合使用优于单独使用其中一种技术。3.岩藻糖基化工程技术对脐血HSC表面CD26表达和活性均无明显影响，CD26活性阻断技术对脐血HSC表面P/E选择素配体活性基团的表达亦无明显影响。两种技术分别作用于归巢的不同靶点，两者联合有叠加作用，且无相互抑制作用，但暂未发现两种技术有相互促进作用。
【图文】：

图 1.分选出 CD34+细胞纯度Fig1. The purity of the isolated cord blood CD34+ce：修复和干预后脐血 HSC 动物体内移植效果各组植入情况比较 2 周各组小鼠的外周血中人 CD45 的表达：仅联D45 的表达，比例为：（0.45±0.78）%，其余各组

图 2. 移植后 2 周小鼠的外周血中人 CD45 的表xpression of CD45 in peripheral blood of mice 2 weeks p第 4 周各组小鼠的外周血中人 CD45 的表达：所有45 的表达，，其中对照组比例为：（0.73±0.22）%，CD26 活性阻断组比例为（3.21±0.43）%，糖（8.87±0.83）%。糖基化组比例略高于其余各组
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

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本文编号：2556483