不可分型流感嗜血杆菌感染与生物膜的关系

发布时间：2019-11-23 20:27

【摘要】：第一部分NTHi体外生物膜的形成【目的】探讨不可分型流感嗜血杆菌（Nontypeablehaemophilusinfluenzae,NTHi）生物膜（Biofilm,BF）体外的形成，为研究NTHiBF相关感染发生机制奠定基础。【方法】以NTHi标准菌株ATCC49247为BF建立对象，铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa，PA）BF阳性菌株ATCC27853为阳性质控，两菌分别培养2、3、4、7天后，分别采用结晶紫法、平板计数法观察两者BF的生长状态，并在第4天采用扫描电镜（Scanningelectronmicroscope,SEM）观察生物膜的结构特点。【结果】结晶紫法BF的吸光度NTHi前4天由0.0591±0.0013升至0.269±0.0028vs.PA0.0634±0.0016升至0.332±0.0028，随后下降，至第7天NTHiBF吸光度降至0.1135±0.0021vs.PA0.1265±0.0050。空白对照为0.0365±0.0028平板计数法NTHi前4天BF内活菌数由(0.530±0.028)×10~7cfu/ml升至(2.275±0.0212)×10~7cfu/ml，至第7天降至(1.036±0.0198)×10~7cfu/ml。PA相应时间点的活菌数由(0.55±0.014)×10~7cfu/ml至(3.705±0.021)×10~7cfu/ml，第7天降至（1.405±0.035）×10~7cfu/ml，各时间点之间,结晶紫法细菌与空白对照之间有统计学差异（P0.05）。除第4天（P0.05）外，其余天数两菌之间无统计学差异（P0.05）。SEM第4天结果显示细菌能形成典型的BF。【结论】NTHi体外可形成BF。结晶紫法、平板计数法和扫描电镜可用于BF常规检测。第二部分儿童NTHi感染常见疾病与体外生物膜的关系【目的】探讨儿童NTHi感染常见疾病体外生物膜的差异性，为明确BF在不同疾病中发挥的作用奠定基础。【方法】选取临床鼻窦炎、中耳炎、肺炎和支气管炎四种疾病，呼吸道分离的80株不可分型流感嗜血杆菌以及标准菌株ATCC49247为研究对象，连续培养5天时间，结晶紫法检测吸光度的大小，第2天的BF结果经扫描电镜观察确认。【结果】临床菌株结晶紫法BF平均吸光度第一天为0.3056±0.021838，第2天最高为0.5516±0.04653，至第5天BF大部分解聚，吸光度为0.2554±0.02229，而标准菌株ATCC49247第一天吸光度仅为0.0305±0.0007，至第4天才达峰值，吸光度为0.255±0.0339，第5天开始解聚，吸光度为0.1945±0.0057。各疾病组之间第2天BF吸光度分别为中耳炎0.67477±0.064936，肺炎0.62190±0.057424，支气管炎0.44705±0.015081，鼻窦炎0.43817±0.017277，第5天BF吸光度为：中耳炎0.32559±0.031621，肺炎0.27371±0.024501，支气管炎0.22098±0.013289，鼻窦炎0.17689±0.028316。各疾病组比较，除支气管炎和鼻窦炎之间无统计学意义（P0.05)以外，其余各组之间、各时间点之间吸光度均有统计学差异（P0.05）【结论】不同感染疾病BF有差异。其中，BF在中耳炎发挥功能最大，肺炎次之，鼻窦炎支气管炎最弱。第三部分NTHi感染致炎蛋白E与生物膜的关系【目的】探讨不可分型流感嗜血杆菌感染促炎蛋白E（ProteinE，PE）与体外BF形成的关系，为BF的干预形成奠定基础。【方法】从300个鼻窦炎和中耳炎中儿童患者中分离NTHi共59株，其中鼻窦炎36株，中耳炎23株。采血进行白细胞计数评估炎症状况。设置2天、3天、4天、5天共4个时间点，提取样本BF和浮游状态的总RNA，RT-PCR方法观察pe以及luxSmRNA的表达。【结果】NTHi的pemRNA与WBC具有相关性(P0.05，r=0.5253），当细菌转录表达pemRNA时，，luxSmRNA为阴性，BF不形成；当pemRNA转录消失后，luxSmRNA为阳性，BF形成。【结论】致炎蛋白E可影响BF的形成。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R378.41

【参考文献】