氧化苦参碱对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制
发布时间：2019-12-05 12:32
【摘要】：目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对人脐静脉平滑肌细胞(humans umbilical vein smooth muscle cells,HUSMCs)钙化的影响及其可能机制。方法:以β-甘油磷酸盐诱导HUSMCs钙化,实验分为对照组、钙化组、单纯OMT组、OMT干预高、中、低剂量组。采用Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法检测细胞钙含量,磷酸苯二钠法测定ALP活性,放射免疫法测定骨钙素(OC)含量,ELISA检测细胞培养液中TGF-β1和细胞内psmad2/3,smad2/3的含量变化,Western blot法检测细胞内Cbfα1蛋白的表达。结果:钙化组与对照组相比平滑肌细胞内可见大量黑色颗粒聚集,钙含量,ALP活性,OC,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白的含量均明显增加;OMT干预后钙化指标均下降,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表达量亦明显减少,且高剂量OMT组效应强于中、低剂量组。结论:OMT可有效抑制β-甘油磷酸盐诱导的HUSMCs钙化,且OMT降低TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表达可能是OMT抑制HUSMCs钙化的机制之一。
【图文】：
HUSMCs 呈梭形及典型的“峰谷”状生长，α-actin 鉴定平滑肌细胞阳性率 ＞ 98%，胞浆内呈现棕黄色丝状物证实为 HUSMCs( 图 1) 。A. 原代 HUSMCs 培养第 6 天( × 40) ; B. HUSMCs 呈“峰谷样”生长( ×100) ; C. HUSMCs 鉴定( 免疫组化 DAB，×200) 。图 1 原代血管平滑肌细胞培养及鉴定Fig. 1 The culture of HUSMCs and the cells identification2. 3 HUSMCs 传代 吸取 1 mL 0. 25% 胰酶入培养瓶中，静置消化 2 min，倒置显微镜下观察见细胞间隙增宽，细胞边缘清晰即可终止消化，，将培养瓶中胰酶倒掉，加入含 10%胎牛血清、100 U·mL－ 1青霉素和链霉素的 DMEM/F12培养液中和胰酶，并轻轻吹打瓶壁，吹打成细胞悬液。实验用 3 ～5 代细胞。2. 4 分组 接种细胞分为 6 组: 对照组( CON 组)单纯 DMEM/F12培养基( 含 3% 胎牛血清) 培养; 钙化组( CAL 组) 在基础培养基中加入 12 mmol·L－ 1的 β-甘油磷酸盐; 单纯 OMT 组( 培养基中含 1 ×10－ 4mol·L－ 1的 OMT) ; 钙化 + OMT 组: 在钙化培养液中分别加入1 ×10－ 2
百分比升高了 42. 03% ( P ＜ 0. 05) ; OMT 低、中、高剂量组与 CAL 组比较，其阳性细胞百分比分别下降了 49. 66%，49. 72，66. 6%( P ＜0. 05，图 3) 。A. CON 组; B. CAL 组; C. 单纯 OMT 组; D. OMT-L 组; E. OMT-M 组;F. OMT-H 组( 图 4 同) 。图 2 OMT 干 预 后 各 组 HUSMCs Von Kossa 染 色 结 果( ×100)Fig. 2 The Von Kossa staining analysis showing the morphologyof HUSMCs after culturing in calcification medium containing 12mmol·L－ 1β-GP and OMT( × 100)3. 2 钙含量变化 与 CON 组相比，CAL 组钙离子含量增加271. 32%( P ＜0. 01) 。OMT 组钙离子含量较CON 组升高了 38. 12% ，差异不显著。OMT 高、中、低剂量组与 CAL 组相比钙离子含量分别下降了42. 03% ，48. 13% ( 分别 P ＜ 0. 01) ，13. 29% ( 表 1) 。与 CON 组比较1)P ＜ 0. 05; 与 CAL 组比较2)P ＜ 0. 01。图 3 不同浓度 OMT 干预 HUSMCs 后钙化细胞百分比变化Fig. 3 The percentages of calcific cells from the Von Kossastaining表 1 HUSMCs 钙含量及 ALP 活性变化( xs
本文编号：2570008
【图文】：
HUSMCs 呈梭形及典型的“峰谷”状生长，α-actin 鉴定平滑肌细胞阳性率 ＞ 98%，胞浆内呈现棕黄色丝状物证实为 HUSMCs( 图 1) 。A. 原代 HUSMCs 培养第 6 天( × 40) ; B. HUSMCs 呈“峰谷样”生长( ×100) ; C. HUSMCs 鉴定( 免疫组化 DAB，×200) 。图 1 原代血管平滑肌细胞培养及鉴定Fig. 1 The culture of HUSMCs and the cells identification2. 3 HUSMCs 传代 吸取 1 mL 0. 25% 胰酶入培养瓶中，静置消化 2 min，倒置显微镜下观察见细胞间隙增宽，细胞边缘清晰即可终止消化，，将培养瓶中胰酶倒掉，加入含 10%胎牛血清、100 U·mL－ 1青霉素和链霉素的 DMEM/F12培养液中和胰酶，并轻轻吹打瓶壁，吹打成细胞悬液。实验用 3 ～5 代细胞。2. 4 分组 接种细胞分为 6 组: 对照组( CON 组)单纯 DMEM/F12培养基( 含 3% 胎牛血清) 培养; 钙化组( CAL 组) 在基础培养基中加入 12 mmol·L－ 1的 β-甘油磷酸盐; 单纯 OMT 组( 培养基中含 1 ×10－ 4mol·L－ 1的 OMT) ; 钙化 + OMT 组: 在钙化培养液中分别加入1 ×10－ 2
百分比升高了 42. 03% ( P ＜ 0. 05) ; OMT 低、中、高剂量组与 CAL 组比较，其阳性细胞百分比分别下降了 49. 66%，49. 72，66. 6%( P ＜0. 05，图 3) 。A. CON 组; B. CAL 组; C. 单纯 OMT 组; D. OMT-L 组; E. OMT-M 组;F. OMT-H 组( 图 4 同) 。图 2 OMT 干 预 后 各 组 HUSMCs Von Kossa 染 色 结 果( ×100)Fig. 2 The Von Kossa staining analysis showing the morphologyof HUSMCs after culturing in calcification medium containing 12mmol·L－ 1β-GP and OMT( × 100)3. 2 钙含量变化 与 CON 组相比，CAL 组钙离子含量增加271. 32%( P ＜0. 01) 。OMT 组钙离子含量较CON 组升高了 38. 12% ，差异不显著。OMT 高、中、低剂量组与 CAL 组相比钙离子含量分别下降了42. 03% ，48. 13% ( 分别 P ＜ 0. 01) ，13. 29% ( 表 1) 。与 CON 组比较1)P ＜ 0. 05; 与 CAL 组比较2)P ＜ 0. 01。图 3 不同浓度 OMT 干预 HUSMCs 后钙化细胞百分比变化Fig. 3 The percentages of calcific cells from the Von Kossastaining表 1 HUSMCs 钙含量及 ALP 活性变化( xs
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