弗氏不完全佐剂加BCG热休克蛋由65对大鼠关节炎的诱导

发布时间：2020-01-30 20:03

【摘要】：类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的以全身多关节慢性滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病，常伴有关节软骨损伤和骨破坏，致残率高。为深入研究RA的发病机制及开发治疗药物，自身免疫性关节炎动物模型是必不可少的工具。佐剂诱导的关节炎（adjuvant induced arthritis，AIA）是目前常用的关节炎动物模型，其发病机制与病理改变类似于人类RA。 弗氏完全佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）常用于AIA模型的诱导，其中卡介苗（Bacille Calmette Guerin，BCG）来源的结核分枝杆菌热休克蛋白65（heat-shock protein65，HSP65）可通过分子模拟参与人类RA和AIA的发病过程。基于此，本研究采用BCG HSP65代替CFA中的BCG成分，与IFA乳化混合，配制HSP65-IFA乳化液，用于诱导大鼠关节炎的研究。我们发现，HSP65-IFA可诱导大鼠产生类似于CFA诱导的AIA病变，表现出足爪肿胀、踝关节滑膜增生、血管翳形成和软骨侵蚀。此模型优于AIA之处在于有抗双链DNA抗体的产生，说明HSP65-IFA诱导的关节炎是一种自身免疫性疾病。我们进一步发现，HSP65的剂量对HSP65-IFA诱导的大鼠关节炎有显著影响，剂量太高或太低均不利于其诱导关节炎发生。 鉴于我们所使用的HSP65蛋白是由大肠杆菌系统表达的重组蛋白，其中含有6×his-tag标签，还可能含有残余的大肠杆菌LPS，为排除这两个因素在HSP65-IFA诱导的关节炎中的作用，我们选择同样为大肠杆菌表达系统所表达且带有6×his-tag标签的蛋白VP1，和非大肠杆菌系统表达、不带有6×his-tag标签的卵白蛋白（ovalbumin，OVA）作为无关蛋白参照，分别与IFA乳化混和后观察其是否能诱导大鼠关节炎的发生。我们发现，，VP1和OVA并不能像HSP65那样有效地诱导大鼠发生自身免疫性关节炎，因此HSP65-IFA对大鼠关节炎的诱导作用与HSP65蛋白的性质有关，而与其残留的LPS和6×his-tag标签无关。 随后，我们将抑制性ODN SAT05f应用于治疗HSP65-IFA或CFA诱导的大鼠关节炎，发现SAT05f能减轻HSP65-IFA诱导的大鼠足肿胀、踝关节病理改变和抗dsDNA抗体的产生，而对CFA诱导的大鼠关节炎没有治疗作用。 综上所述，HSP65-IFA可用于诱导大鼠自身免疫性关节炎模型，SAT05f具有治疗RA的潜在应用价值。
【图文】：

SP65-IFA 诱导大鼠自身免疫性关节炎模型大鼠性别选择CFA 可诱导经典的佐剂性关节炎模型，但不同性别的 Wistar 大鼠对其节炎反应不同。因此，为了得到发病率稳定且病变程度一致的关节炎分别观察了 CFA 对雌性和雄性大鼠关节炎的诱导作用。首先选取体50 g 的雌性和雄性 Wistar 大鼠各两只，将其左后足足底用 75%乙醇掌皮内注射 CFA 100 μl/只，注射后按压数十秒防止 CFA 逆流溢出。造密切观察模型鼠后足及踝关节红肿情况和行走姿态。我们发现雄性大鼠鼠注射侧足爪红肿更为明显（Fig. 1），步态蹒跚，行走时注射侧后足不地。结果说明，雄性 Wistar 大鼠对 CFA 诱导的关节炎更易感，因此后用雄性大鼠建立佐剂性关节炎模型。

图 2. HSP65-IFA 引起大鼠足爪肿胀Fig 2. HSP65-IFA induced paw swelling in rats.Male Wistar rats were injected with HSP65-IFA, CFA, IFA, HSP65 (5μg/rat)and saline, respectively. (A) Representative gross appearance. The paws of rat injectedwith saline (left) and HSP65-IFA (right) were photographed on day 1, showing thesevere swelling on the injected side of ankle joint in HSP65-IFA treat rat. (B) Pawvolumes of arthritic rats. After induction, the paw volumes of the rats were measuredevery other day. Injected side: left; un-injected: right. Data are given as the mean ofeach group (n=4). *P<0.01 and **P<0.001 vs. saline, #P=0.029 vs. CFA.1.2.2 HSP65-IFA 诱导大鼠踝关节病理改变在观察到 HSP65-IFA 能诱导大鼠足爪肿胀之后，为了检测其能否诱导大鼠踝关节发生类风湿关节炎病理改变，我们在造模后第 30 天处死模型大鼠，分离
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392.11

【共引文献】

相关期刊论文 前8条

1 郑红艳;吴学军;刘全海;;类风湿关节炎分子靶向治疗新药的研究进展[J];世界临床药物;2013年05期

2 赵娜;;嗜酸性筋膜炎1例报道[J];中外医疗;2008年02期

3 李文倩;韩国雄;;嗜酸性筋膜炎一例误诊讨论并文献复习[J];临床误诊误治;2010年10期

4 季兰岚;李光韬;郝燕捷;张卓莉;;肿瘤坏死因子抑制剂在指征外自身免疫性疾病中的应用[J];中华临床免疫和变态反应杂志;2010年01期

5 王革;竺红;宫怡;;嗜酸性筋膜炎6例分析并文献复习[J];宁夏医科大学学报;2012年01期

6 蒲晓英;杨南萍;;嗜酸性筋膜炎研究进展[J];现代临床医学;2007年02期

7 郝爱辉;白秋江;胡跃民;;抗类风湿关节炎药——Tocilizumab[J];医药导报;2012年01期

8 曾清华;饶慧;徐湘玉;;嗜酸性筋膜炎一例报道[J];中国现代医学杂志;2014年03期

本文编号：2574798