大鼠脐带间质干细胞的培养与鉴定

发布时间：2020-02-08 18:08

【摘要】：目的 探讨早产SD大鼠脐带沃顿胶质组织分离大鼠脐带间质干细胞的可能性,研究其生物学特征及体外诱导分化潜能,为下一步进行同种异体移植进行细胞生物疗法奠定基础。 方法 通过将SD大鼠按雄:雌=1:2人工合笼获得孕19天大鼠,在无菌环境下通过剖宫产获得新生大鼠,机械分离大鼠脐带组织剔除血管组织获得沃顿胶质组织,采用组织块直接贴壁法在含10%FBS的DMEM/F12培养基中培养脐带组织获得大鼠脐带沃顿胶质细胞,并进行传代、冻存和复苏;对培养所得大鼠脐带沃顿胶质细胞采用直接计数法进行生长曲线绘制;通过细胞免疫组化检测大鼠脐带间质干细胞(rUCMSCs)中Brdu阳性表达;取3代rUCMSCs分别添加成脂诱导培养基和成骨诱导培养基进行诱导分化潜能鉴定;取3代rUCMSCs采用流式细胞仪进行细胞周期、细胞表面标记鉴定。 结果 大鼠脐带沃顿胶质组织可在体外培养出梭形成纤维样贴壁生长细胞;大鼠脐带沃顿胶质细胞可在体外快速增殖;Brdu可在48小时内高效掺入大鼠脐带沃顿胶质细胞呈阳性表达;大鼠脐带沃顿胶质细胞可在体外诱导体系中向成脂、成骨分化;大鼠脐带沃顿胶质细胞92.14%处于G0-G1期,阳性表达间质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD90,而不表达造血干细胞标记CD34和CD45。 结论 SD大鼠脐带沃顿组织中可培养出大鼠脐带沃顿胶质细胞,该细胞在形态学、生长增殖特点、诱导分化潜能和细胞表面抗原表达方面具有间质干细胞的形态特征,符合脐带间质干细胞的鉴定标准,是一类多能干细胞,有望用于细胞生物治疗、组织工程等研究。
【图文】：

织块周围出现少量细胞生长，部分呈长梭形贴壁生长，部分细胞成多角形贴壁生长，随时间增加细胞逐渐增多、密集而渐渐呈放射状排列，至第 4 天时可见细胞排列密集(图 1)，在高倍镜下可见细胞以梭形为主，部分成多角形(图 2)。而至第 6 天时可见组织块周围细胞成漩涡状紧密排列，部分细胞融合，在远离组织块周围的细胞排列相对稀疏，部分可见成多角形、星形或三角形，且大小不一(图3)。经胰酶消化后的 rUCMSCs 呈圆形,胞体较大,胞质透明，首次传代后 24 h 内完全贴壁伸展,至第 3 天时即可见细胞紧贴于培养瓶壁，部分呈成梭形纤维样生长，且逐渐形成漩涡状排列(图 4)。第 2 代细胞在传代 24 小时后即开始快速生长(图 5)。细胞传至第 3、4 代时，稳定快速生长，细胞形态、大小与原代细胞无明显变化(图 6，图 7)。

织块周围出现少量细胞生长，部分呈长梭形贴壁生长，部分细胞成多角形贴壁生长，随时间增加细胞逐渐增多、密集而渐渐呈放射状排列，至第 4 天时可见细胞排列密集(图 1)，在高倍镜下可见细胞以梭形为主，部分成多角形(图 2)。而至第 6 天时可见组织块周围细胞成漩涡状紧密排列，部分细胞融合，在远离组织块周围的细胞排列相对稀疏，部分可见成多角形、星形或三角形，且大小不一(图3)。经胰酶消化后的 rUCMSCs 呈圆形,胞体较大,胞质透明，首次传代后 24 h 内完全贴壁伸展,至第 3 天时即可见细胞紧贴于培养瓶壁，，部分呈成梭形纤维样生长，且逐渐形成漩涡状排列(图 4)。第 2 代细胞在传代 24 小时后即开始快速生长(图 5)。细胞传至第 3、4 代时，稳定快速生长，细胞形态、大小与原代细胞无明显变化(图 6，图 7)。
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

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本文编号：2577573