混合皮肤移植中自体角朊细胞通过表达B7-H1而产生免疫抑制作用的相关研究

发布时间：2020-03-09 10:12

【摘要】：目的建立MELC体系(体外模拟混合皮肤移植模型),探讨B7-H1分子在自体角朊细胞诱导的免疫抑制中的作用和相关机制。方法 1.分离两只不同KM乳鼠(a,b乳鼠新生1-3日龄,无毛发生长)的淋巴细胞,表皮细胞,角朊细胞,并用细胞免疫组织化学方法鉴定角朊细胞。 2.用分离的淋巴细胞,表皮细胞,角朊细胞,建立MELC体系。引入自体角朊细胞,在体外模拟自体皮岛效应。 3.在有自体角朊细胞参与的与无自体角朊细胞参与的MELC体系中,分别混合培养12h,24h,36h后,分离角朊细胞,流式细胞术检测B7-H1的表达。同样条件下分离淋巴细胞,流式细胞术检测PD-1的表达。 4.在有自体角朊细胞参与的与无自体角朊细胞参与的MELC体系中,分别混合培养12h,24h,36h后,分离淋巴细胞,提取RNA,实时荧光定量PCR检测IL-10,Foxp3,GATA-3 mRNA的表达。结果 1.分离得到的淋巴细胞,表皮细胞活性好,存活率高。分离的角朊细胞纯度高,活性好,存活率高,采用细胞免疫组织化学鉴定,阳性率高。 2.原代培养的角朊细胞,表皮细胞,淋巴细胞建立的MELC体系稳定,混合培养稳定。 3.在有自体角朊细胞参与的MELC体系中,12h,24h,36h后,分离角朊细胞,流式细胞术检测B7-H1表达呈逐渐升高趋势,有显著差异(P0.05)。同样条件下分离淋巴细胞,流式细胞术检测PD-1,表达呈升高趋势,有显著差异(P0.05)。而无自体角朊细胞参与的MELC体系中,角朊细胞,淋巴细胞均无显著差异(P0.05)。 4.在有自体角朊细胞参与的MELC体系中,12h,24h,36h后,分离淋巴细胞,提取RNA,实时荧光定量PCR检测IL-10,Foxp3,GATA-3的表达呈升高趋势,有显著差异(P0.05)。而无自体角朊细胞参与的MELC体系中,无以上表达趋势,均无显著差异(P0.05)。结论 1.混合皮肤移植中,自体角朊细胞可表达共刺激分子B7-H1,介导T细胞的活化,并伴随B7-H1受体PD-1在T淋巴细胞表面表达的上调。 2. MELC体系中分泌的IL-10来源于淋巴细胞,并非角朊细胞。 3. MELC体系中诱导出一群Foxp3+的调节性T细胞,负向调节免疫反应。 4.自体角朊细胞通过表达B7-H1,使Th2细胞含量升高。
【图文】：

趋势图,对照组,趋势,角朊细胞

2 流式细胞术结果2.1 角朊细胞表面 B7-H1 的表达在有自体角朊细胞参与的实验组 MELC (La+Eb+KCa)中，12h 后，KC 即的表达，依次检测 24h,36h，，B7-H1 的表达呈递增趋势(P<0.05,有统计学2-4）而未有自体角朊细胞参与的各对照组 (La+Eb+KCb，La+KCa)中，呈极低表达（图 5-10），各组之间并无差异（P㧐0.05）(图 2-4) 实验组 MELC (La+Eb+KCa)，B7-H1 表达呈递增趋势

趋势图,趋势,对照组,中淋巴细胞

(图 8-10) 对照组 (La+KCa)，B7-H1 无表达趋势2.2 MELC 体系中淋巴细胞 PD-1 的表达在 La+Eb+KCa体系中，12h,2淋巴细胞 PD-1 的表达（图 11-13），呈递增趋势（P<0.05,有统计学意
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

【参考文献】