ERα特异性抑制剂对小鼠植入前胚体外发育和合子基因组激活的影响

发布时间：2020-03-09 12:23

【摘要】：目的： 观察雌激素受体（estrogen receptor，ER）抑制剂（ICI182780）、ERα特异性抑制剂（MPP）和ERβ特异性抑制剂（PHTPP）以及ERα特异性抗体对小鼠植入前胚体外发育的影响；探讨ERα特异性抑制剂（MPP）对小鼠合子基因组激活（zygotic genome activation，ZGA）中四个相关基因，以及ERα目的基因c-Myc的表达影响，为进一步阐明ERα在小鼠植入前胚发育中的作用奠定基础。 方法： 1、分别取KM雌性小鼠与KM雄性小鼠（♀KM×♂KM），以及B6C3F1雌性小鼠与KM雄性小鼠（♀B6C3F1×♂KM）交配所得的1-细胞胚和2-细胞胚，观察其在M16培养液、不同浓度的ICI182780培养液、不同浓度的MPP培养液、不同浓度的PHTPP培养液以及不同浓度的ERα特异性抗体培养液中体外发育的情况； 2、收集KM小鼠1-细胞胚，分别置于M16和含MPP（25μΜ）的培养液中培养，获取体外发育的2-细胞胚： ⑴激光共聚焦扫描显微镜观察胚内核ERα定位和表达情况； ⑵Western-blot检测ERα、c-MYC蛋白水平； ⑶Realtime-PCR测定ERα、c-Myc、Jmjd2c、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1和eIF1AmRNA水平。 结果： 1、ER抑制剂（ICI182780）、ERα特异性抑制剂（MPP）和ERα特异性抗体使小鼠1-细胞胚和2-细胞胚体外发育受阻于2-细胞阶段，，很少能过渡至4-细胞胚；而ERβ特异性抑制剂（PHTPP）无上述作用； 2、激光共聚焦扫描显微镜显示，MPP组中，核ERα荧光相对强度低于M16组（P0.01）； 3、Western blot检测表明，MPP组和M16组中，ERα、c-MYC蛋白表达水平没有明显差异，不具有统计学意义（P0.05）； 4、Realtime-PCR结果提示，MPP组中，MuERV-L mRNA水平明显低于M16组（P0.01），而其他基因mRNA水平与M16组比较，没有明显差别（P0.05）。 结论： ER抑制剂（ICI182780）、ERα特异性抑制剂（MPP）和ERα特异性抗体对小鼠植入前胚2-细胞至4-细胞体外发育过渡具有抑制作用，进而使植入前胚无法发育至囊胚阶段，而ERβ特异性抑制剂（PHTPP）对其抑制效果不明显，提示ERα在小鼠植入前胚2-细胞至4-细胞体外发育过渡中的作用；ERα特异性抑制剂使合子基因组激活相关基因MuERV-L mRNA表达水平下调，提示ERα可能是通过影响与ZGA相关基因的表达水平来发挥其在合子基因组激活中的作用。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329;Q954.4

【参考文献】

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本文编号：2585826