寨卡病毒在小鼠体内的增殖及其诱导的免疫应答分析

发布时间：2020-03-29 13:53

【摘要】：寨卡病毒(ZIKA virus,ZIKV)是有包膜的单股正链RNA病毒,属黄病毒科黄病毒属蚊媒病毒的一种。ZIKV感染易导致格林巴利综合征和新生儿先天小头畸形。由于缺乏理想的动物感染模型,ZIKV感染的病毒学特征、感染诱导的免疫应答特征以及致病机制的研究还不够深入。本研究观察分析了亚洲流行株ZIKV/H/PF/2013在细胞系中的增殖特征。采用足垫接种病毒的方式进一步观察分析了该毒株在小鼠体内的增殖及其诱导的免疫应答特征。一,在体外细胞系统进行了病毒的扩增并了解其增殖特征。利用C6/36细胞系扩增病毒,其滴度可达5×10~7-10~8 PFU/ml。病毒生长曲线显示ZIKV在BHK-21和A549两种细胞系中均于感染后的12小时至48小时呈直线型增殖,病毒产量在48小时达高峰,随后呈缓慢下降趋势。针对病毒基因组设计了4种特异性siRNA,并利用A549细胞系检测其抗病毒活性。与对照组相比,4种siRNA均具有一定的抗病毒活性,其中3#siRNA的抗病毒活性最强,在6.25 nM浓度下对病毒的抑制率达到60%。二,以野生型C57BL/6和AG6小鼠为研究对象,通过足垫接种病毒的方式检测了动物体重变化、存活率、组织嗜性、组织病理等指标,系统评价了病毒在感染局部和远端组织的增殖特征。结果显示ZIKV不能在野生型小鼠建立系统感染,但可对AG6小鼠形成致死性感染;ZIKV具有广泛的组织嗜性(能感染小鼠脑、心、肝、脾、肺、肾等多种器官和组织);病毒感染能够引起显著的组织病理变化。三,利用荧光流式细胞术分析了小鼠足垫(接种原位)、乆窝淋巴结(引流淋巴结)、外周血和脾脏中各免疫细胞亚群病毒包膜蛋白(ZIKV-E)的表达以及在上述组织/器官中的组成和活化情况。结果表明:ZIKV感染的AG6小鼠体内包括中性粒细胞在内多种免疫细胞亚群呈ZIKV-E蛋白阳性;ZIKV感染诱导了中性粒细胞的募集;ZIKV促进外周血中DC以及外周血和脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化而抑制引流淋巴结中DC的活化。综上所述,本论文深入了解了ZIKV在小鼠体内的增殖特征,首次发现包括中性粒细胞在内的多种免疫细胞亚群呈ZIKV-E蛋白阳性以及中性粒细胞的大量浸润,该结果提示ZIKV存在体内感染多种免疫细胞亚群的可能。本研究对进一步了解ZIKV在体内的传播特征及致病机制具有重要参考价值。
【学位授予单位】：中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R373

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本文编号：2606061