Cbl催化甘露糖受体K48多聚泛素化在尼古丁促进树突状细胞交叉提呈中的作用

发布时间：2020-04-18 01:35

【摘要】：树突状细胞(dendritic cells,DCs)是最为重要的专职性抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC),其所诱生的CD8+T细胞应答是机体抗肿瘤和抗胞内微生物感染的重要效应细胞。我们前期的研究发现,乙酰胆碱N型受体激动剂尼古丁刺激可促进CD8+DCs介导的抗原交叉提呈,从而增强其抗肿瘤效应。甘露糖受体MR作为DCs表面最重要的模式识别受体之一,它所介导的抗原内吞是CD8+DCs介导抗原交叉提呈的关键步骤。文献报道,OVA负载能够促进MR的K48多聚泛素化从而促进抗原至内体的定位,我们前期的研究也发现,尼古丁刺激不仅上调了 MR的表达而且也促进了内吞抗原转运至内体。但截至到目前,我们尚不清楚,MR发生K48多聚泛素化修饰过程中关键的E3连接酶以及其在CD8+DCs介导抗原交叉提呈中的作用。为此,本课题首先以Real-time PCR、Western Blot筛选可能的针对MR的K48多聚泛素化修饰的关键E3连接酶;次以免疫共沉淀技术检测E3连接酶C-Cbl以及Cbl-c在内体中的定位以及与MR的相互作用情况;再以基因沉默结合免疫共沉淀技术检测C-Cbl以及Cbl-c基因沉默对MR的K48多聚泛素化修饰的影响;最后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测C-Cbl以及Cbl-c基因沉默对交叉提呈产物SIINFEKL-H2Kb形成的影响。结果显示:乙酰胆碱N型受体激动剂尼古丁刺激能够促进E3连接酶C-Cbl和Cbl-c基因水平和蛋白水平的表达;尼古丁刺激显著增强了 Cbl的磷酸化激活;尼古丁刺激不仅增加了 C-Cbl以及Cbl-c至内体的定位,而且促进了其与MR的相互作用;E3连接酶C-Cbl和Cbl-c基因沉默不仅逆转了尼古丁刺激对MR的K48多聚泛素化的增强作用,而且减弱了 CD8+DCs交叉提呈的能力。综上所述,本课题发现了 MR的K48多聚泛素化修饰过程中关键的E3连接酶,进而完善了尼古丁促进MR的K48多聚泛素化修饰从而增强CD8+DC交叉提呈的具体分子机制。
【图文】：

外源性抗原摄取的机制决定了它被提呈的途径，研究表明，如果模式逡逑抗原ＯＶＡ经ＭＲ介导进入ＤＣｓ，那么ＯＶＡ将被靶向到早期内体进而发生交叉逡逑提呈反应启动ＣＤ８＋的Ｔ细胞免疫应答，如图２所示；而清道夫受体介导外源性逡逑抗原内吞进入溶酶体降解为抗原肽，进而与ＭＨＣＩＩ类分子结合，最终引起ＣＤ４＋逡逑的Ｔ细胞免疫应答［Ｍ］。由此我们知道，ＭＲ是ＤＣｓ介导抗原发生交叉提呈的关逡逑键受体。ＢｕｒｇｄｏｒｆＳ等人的研宄发现，ＭＲ的胞质区发生Ｋ４８多聚泛素化修饰是逡逑ＭＲ介导内吞抗原转位至胞质中的先决条件〖６］。我们实验室前期的研宄也发现，，逡逑乙酰胆碱Ｎ型受体激动剂尼古丁能够显著增强ＤＣｓ的交叉提呈能力［８］，并且尼逡逑古丁刺激通过激活ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ－ｍＴＯＲ－ｐ７０Ｓ６通路上调了邋ＭＲ的表达［１３］。提示ＭＲ逡逑介导的内吞抗原定位于早期内体是ＣＤ８＋ＤＣＳ介导抗原交叉提呈的关键环节，ＭＲ逡逑的Ｋ４８多聚泛素化修饰在此环节中占据重要地位。逡逑ＣＷ逦ＣＯＳ＇逦丫邋ＭＲ邋ｐ邋ＭＨＣＩ逡逑Ｔ逦由邋ｄ逦了邋⑶逡逑？ｐｉｎ0ｏ＿＊逦＊°ＶＡ邋ＭＨＣＨ逡逑＊逦＊邋ＯＶＡ－ｄｅｒｌｖｅｄ逡逑ＳＲ－ｍ？＜ｌｉａｔｅｄ邋／逡逑ｅｏｄｏｃｙｔｏｓｉｉ／邋＼逦＼逡逑呭巍獤躵>ＴＫ＇．“逡逑图２迎介导的＃埃福郹埃８交叉提呈过程逡逑（ＢｕｒｇｄｏｒｆＳ，邋Ｓｃｉｅｎｃｅ．邋２００７，２７：３１６－６１２）逡逑３逡逑

的巨噬细胞以及内皮细胞中。ＭＲ是由Ｎ端富含半胱氨酸的区域、ＩＩ型纤连蛋白逡逑重复区域（ＦＮＩＩ）、多个Ｃ型凝集素样糖类识别区域、一个跨膜结构域以及较短逡逑的Ｃ端胞质结构域五个结构域组成，如图１所示。其胞外的富含半胱氨酸的结构逡逑域具有凝集素活性，能够与Ｓ０４－４－Ｎ－乙憸半乳糖胺、Ｓ０４－３－Ｎ－乙酰半乳糖胺和逡逑Ｓ０４－３－半乳糖结合；Ｃ型凝集素样糖类识别区域能够识别和结合甘露糖、岩藻糖逡逑和Ｎ－乙酰胺基葡萄糖为末端的糖类；胞浆内段的１４１０、１４１１、１４４１三个赖氨酸逡逑残基位点是ＭＲ发生泛素化修饰的位点。ＭＲ主要通过对甘露糖蛋白的清除在机逡逑体免疫自稳态以及抗肿瘤免疫中发挥重要作用［１７＿１９］。逡逑２逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392

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本文编号：2631552