嗜酸乳杆菌代谢有机酸检测及其神经保护作用

发布时间：2020-04-28 20:06

【摘要】：脑肠轴(brain-gut axis)是由胃肠道、肠神经系统和大脑构成的网络,这些实体之间的双向信息交流影响着免疫、消化、代谢以及应激反应等重要生理功能。越来越多的动物和临床研究表明肠道菌群在脑肠轴双向应答中发挥了重要作用,尤其是与中枢神经的功能发育、疾病发生等密切相关。嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,La)作为肠道菌群中主要益生菌之一,对人类的健康有着积极的作用,在食品行业和医药领域都得到广泛的应用,然而目前对于益生菌与神经系统之间相互影响的原因还不明确。综合以上研究背景,本课题首先对嗜酸乳杆菌进行复苏和活化,测定其生长曲线,并对其生长时期进行分析来获取嗜酸乳杆菌上清液(La supernatant,L.a.s),并利用高效液相色谱建立检测嗜酸乳杆菌上清液中代谢有机酸含量的方法,最后研究L.a.s对神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)增殖的影响。本研究首先对购自中国普通微生物菌种保藏中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)的嗜酸乳杆菌(保藏编号:ATCC 4356)进行复苏和活化,利用扫描电镜观察嗜酸乳杆菌的微观形态,并测定其生长曲线,发现嗜酸乳杆菌的生长稳定期在20h到32h之间。之后对L.a.s中乳酸和乙酸的HPLC检测方法进行优化,获得最优色谱检测条件:用C_(18)色谱柱进行分离,柱温30?C,流动相为0.01mol/L NaH_2PO_4溶液(1mol/L磷酸调节pH值至2.6),流速1mL/min,检测波长215nm,整个过程可在10min内完成。在优化的色谱条件下,乳酸和乙酸的线性范围为1.0-50.0mmol/L,乳酸和乙酸的加标回收率分别为97.5%-103.0%和96.5%-103.8%,相对标准偏差分别为1.39%和3.56%。利用该方法对处于生长稳定期的上清液进行定量分析,发现培养时间为30h的L.a.s,乳酸和乙酸含量达到最大值,说明此时L.a.s中代谢产物含量最大,所以选择培养时间为30h的L.a.s,来进行下一步研究。最后考察L.a.s对NSCs增殖的影响,先进行NSCs的原代提取和传代培养,免疫细胞化学鉴定结果显示,提取的NSCs具有自我更新和多向分化潜能,可以作为实验所需的种子细胞。将培养时间为30h的L.a.s按不同体积分数作用NSCs,形态学观察及死活染色结果表明,L.a.s作用下的NSCs生长正常。CCK-8法检测结果发现在加入的L.a.s体积分数为4%时,NSCs活率达到最高,细胞的存活率提高至对照组的122.72±7.37%,该浓度下可进一步考察L.a.s对NSCs分化行为的影响,从而更深入的探究其神经保护作用。
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R371

【参考文献】