CXCL12对人嗅黏膜间充质干细胞迁移能力、干性及免疫调节的影响

发布时间：2020-05-25 08:21

【摘要】：目的探究CXCL12对人嗅黏膜间充质干细胞迁移能力、干性及免疫调节的影响。方法1.人嗅黏膜间充质干细胞的培养及鉴定:在鼻内镜直视下,夹取中鼻甲后方正常鼻黏膜组织,采用组织贴壁法培养嗅黏膜间充质干细胞;利用流式细胞仪检测细胞的表面标记物,免疫荧光检测Nestin及STRO-1,对其进行鉴定。2.培养至P3代,将鼻黏膜间充质干细胞消化下来,并传代培养于6孔板,待细胞融合度接近80%,随机分成2组,即对照组和实验组,对照组用D/F-12加10%胎牛血清培养,实验组在此基础上另添加100ng/mL的CXCL12重组蛋白,放入37℃、体积分数为5%的C02、饱和湿度恒温培养箱培养。3.在对照组和实验组6孔板中长满的细胞上用10μL移液枪头人为制造一条粗细均匀的划痕,放入培养箱培养,24小时、48小时后分别对划痕区域进行显微镜下拍照。观察其划痕融合的情况。4.将对照组和实验组的细胞培养48小时后,消化下来,收集细胞并提取总蛋白,分别进行CXCR4(CXCL12的受体)和Nestin的Western Blotting实验,检测对照组和实验组中这2种蛋白的表达差异。5.在CXCL12处理48小时后,分别收集对照组和实验组的上清,通过ELISA试剂盒检测两组细胞分泌的IL-6含量差异。结果1.培养的细胞呈纺锤形或长条形,也可有数个分支,贴壁生长,融合度高时呈旋涡状或平行生长,CD34、CD45表达阴性,CD73、CD90、CD105表达阳性,且细胞纯度达到97%以上,此外,免疫荧光显示,细胞的Nestin和STRO-1表达阳性,符合间充质干细胞的鉴定标准。2.在细胞的划痕实验中,经过CXCL12的处理,实验组划痕融合速度较对照组快。3.在CXCR4的Western Blotting实验中,实验组较对照组表达量上调,经灰度分析,P0.01,结果有统计学差异。4.在Nestin的Western Blotting实验中,实验组较对照组表达量下调,经灰度分析,P0.01,结果有统计学差异。5.在IL-6的ELISA实验中,实验组较对照组分泌量明显下降,P0.01,结果有统计学差异。结论1.CXCL12可以直接提高嗅黏膜间充质干细胞(OM-MSCs)的迁移能力,并且通过使OM-MSCs中的CXCR4表达上调进一步提高OM-MSCs的迁移能力。2.CXCL12通过下调OM-MSCs中Nestin的表达,降低了OM-MSCs的干性。3.CXCL12 通过下调 OM-MSCs 分泌的 IL-6,改变了 OM-MSCs免疫调节的作用。
【图文】：

ＳＴＲＯ－１的表达及间充质干细胞表面标记物鉴定逡逑取Ｐ３代人嗅黏膜间充质干细胞进行免疫荧光检测，，培养的细胞逡逑呈纺锤形或长条形，贴壁生长，ＳＴＲ０－１和Ｎｅｓｔｉｎ表达阳性（图３－１邋）。逡逑｜邋■■逡逑图３－１人嗅黏膜间充质干细胞形态学特征及Ｎｅｓｔｉｎ和ＳＴＲＯ－１的免疫荧光实验逡逑Ａ．人嗅黏膜间充质干细胞：左边黑色区域为嗅黏膜组织块，右边旋涡状生长的细胞为人嗅逡逑黏膜间充质干细胞0４０）；邋Ｂ．ＳＴＲＯ－１染色：红色胞体部分显示为标记的ＳＴＲＯ－丨，蓝色为细逡逑胞核ＤＡＰＩ染色；Ｃ．邋Ｎｅｓｔｉｎ染色：绿色胞体部分显示为标记的Ｎｅｓｔｉｎ，蓝色为细胞核ＤＡＰＩ逡逑染色。逡逑经流式细胞仪检测，ＣＤ３４、ＣＤ４５表达阴性，ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５逡逑表达阳性，且细胞纯度达到９７％以上（图３－２），符合间充质干细胞的逡逑鉴定标准。逡逑１８逡逑

部分进行拍照。结果显示，２４小时、４８小时实验组的划痕融合度均逡逑较对照组高，证明实验组嗅黏膜间充质干细胞的迁移能力在ＣＸＣＬ１２逡逑的作用下提高了（图３－３）。逡逑１９逡逑
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2

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本文编号：2679855