α-硫辛酸对帕金森病模型中铁转出的调节机制

发布时间：2020-05-29 21:07

【摘要】：目的:通过检测α-硫辛酸(α-LA)对帕金森病(PD)模型大鼠黑质(SN)以及PD细胞模型中膜铁转运蛋白1(FP1)、铁调节蛋白1(IRP1)和铁调节蛋白2(IRP2)表达的影响,探讨α-LA在PD模型中调节铁转出的机制。方法:动物实验:健康雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组(15只)、模型组(45只)。采用立体定位技术将6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠右侧纹状体建立PD动物模型,假手术组注入同等量的生理盐水。建模第4周后运用旋转实验筛选成功模型(30只),随机分为PD模型组(15只)和PD治疗组(15只)。PD治疗组给予α-LA 50mg/kg.d腹腔注射,连续2周,PD模型组给予同等量生理盐水。治疗14天后,用Cylinder test测试大鼠左前肢的使用率;取各组大鼠右侧中脑SN,采用免疫组织化学染色方法检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况,采用普鲁士蓝染色方法检测铁阳性细胞数量的变化,采用Western Blot方法检测FP1、IRP1、IRP2的表达情况。细胞实验:体外培养PC12细胞,运用MTT法分别筛选6-OHDA的最适造模浓度和α-LA的最适保护浓度。分为3组:正常对照组、模型组(100μmol/L 6-OHDA)、α-LA干预组(100μmol/Lα-LA+100μmol/L 6-OHDA)。采用比色法测定各组细胞内丙二醛(MDA)、铁含量;采用Western Blot方法测定各组细胞内FP1、IRP1、IRP2的表达情况。结果:动物实验:(1)与假手术组比较,PD模型组大鼠左前肢使用率显著降低(P0.01);右侧SN内TH阳性神经元数量明显减少(P0.01),铁染色阳性细胞数量明显增加(P0.01),FP1蛋白表达明显减少(P0.01),IRP2蛋白表达明显增加(P0.01),IRP1蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。(2)与PD模型组比较,PD治疗组大鼠左前肢使用率明显上升(P0.01);右侧SN内TH阳性神经元数量明显增加(P0.01),铁染色阳性细胞数量明显减少(P0.01),FP1蛋白表达明显增加(P0.01),IRP2蛋白表达明显减少(P0.01),IRP1蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。细胞实验:(1)与正常对照组比较,模型组细胞活力明显下降(P0.01);细胞内MDA、铁含量明显增加(P0.01);细胞内FP1蛋白表达明显降低(P0.01),IRP1、IRP2蛋白表达明显增加(P0.01)。(2)与模型组比较,α-LA干预组细胞活力明显上升(P0.01);细胞内MDA、铁含量明显减少(P0.01),细胞内FP1蛋白表达明显增加(P0.01),IRP1蛋白表达降低(P0.05),IRP2蛋白表达明显降低(P0.01)。结论:(1)PD模型大鼠中α-LA可降低中脑SN内IRP2的表达,通过IRP2/IRE途径,使FP1表达增加,进而增加细胞内铁离子的转出,降低铁沉积。(2)PD细胞模型中α-LA可降低细胞内IRP1、IRP2的表达,通过IRPs/IRE途径,增加FP1的表达,促进细胞对铁离子的转出,抑制铁沉积。
【图文】：

贵州医科大学 2018 届科学学位硕士研究生学位论文20图2-1 各组大鼠右侧黑质TH阳性神经元的表达情况(A:假手术组；B:PD模型组；C:PD治疗组)（ABC法×40）标尺=100 μm 注:右上插图显示箭头所指神经元200倍镜下观察结果Fig.2-1The expression of TH positive neurons in the right substantia nigra in each group rats(A: sham operation group; B: PD model group; C: PD treatment group)（ABC method ×40）ruler=100 μm Note: The upper right illustration shows the observations of the 200 timesmicroscopic neurons表 2-2 各组大鼠右侧中脑黑质区域 TH 阳性细胞数目的比较( ± s，n = 3 )Tab. 2-2 Comparison of the number of TH positive cells in the right midbrain substantianigra of rats in each group组别 TH 阳性细胞数（个）假手术组 148.00±2.00PD模型组 27.33±3.06**PD 治疗组 71.00±3.61##注：**P<0.01 与假手术组比较；##P<0.01 与 PD 模型组比较。2.1.4 普鲁士蓝染色检测大鼠右侧黑质铁沉积情况如图所示（图2-2），黑质区域铁染色阳性细胞呈亮蓝色。假手术组大鼠右侧黑质区域极少见到铁染色阳性细胞，其余各组大鼠右侧黑质均能看到铁染色阳性细胞，，形态不规则，主要分布在黑质致密部，少量在黑质网状部。与假手术组比较，PD模型组大鼠右侧黑质铁阳性细胞数量明显增加（P<0.01）；与PD模型组比较，PD 治疗组大鼠右侧黑质铁阳性细胞数量显著减少（P<0.01），见（表2-3）。

贵州医科大学 2018 届科学学位硕士研究生学位论文21图2-2 各组大鼠右侧中脑黑质铁染色阳性细胞情况(A：假手术组；B：PD模型组；C：PD治疗组) (200×) 标尺=100 μmFig.2-2 The expression of iron-positive cells in the right substantia nigra in each group rats(A: sham operation group; B: PD model group; C: PD treatment group) (200×)ruler=100 μm表 2-3 各组大鼠右侧黑质铁染色阳性细胞数目的比较( ± s，n =3，个/HP)Tab.2-3 Comparison of the number of iron positive cells in the right substantia nigra of ratsin each group组别 铁染色阳性细胞数假手术组 0.33±0.58PD模型组 10.00±1.00**PD 治疗组 3.67±0.58##注：**P<0.01 与假手术组比较；##P<0.01 与 PD 模型组比较。2.1.5 Western Blot 法检测大鼠右侧黑质 FP1、IRP1、IRP2 蛋白水平Western Blot检测结果如（图2-3，表2-4）所示。与假手术组比较，PD模型组大鼠右侧中脑黑质FP1蛋白表达明显减少（P<0.01），IRP2蛋白表达明显增加（P<0.01），IRP1蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）；与PD模型组比较，PD治疗组大鼠右侧中脑黑质FP1表达明显增加（P<0.01）
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.5;R-332

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本文编号：2687500