球形金纳米颗粒对骨髓间充质干细胞自噬和外泌体分泌的影响

发布时间：2020-06-14 15:38

【摘要】：目的:自噬和外泌体是细胞普遍存在的生物学现象。骨髓间充质干细胞的自噬对维持干细胞分化以及细胞抗应激能力发挥重要作用;干细胞分泌的外泌体参与了组织损伤修复、炎症介导等众多生理活动。纳米材料被广泛应用于骨髓间充质干细胞等生物医学领域的研究。球形金纳米颗粒对干细胞自噬和外泌体分泌的影响尚不十分明确。因此,进一步明确金纳米颗粒对干细胞自噬和外泌体分泌的影响,对金纳米颗粒在生物医学应用以及干细胞外泌体研究中都要重要作用。方法:利用柠檬酸还原法用柠檬酸三钠还原四氯金酸合成球形金纳米颗粒,透射电子显微镜观察纳米颗粒的大小的形态,检测纳米颗粒紫外可见光谱的吸收峰。提取大鼠骨髓间充质干细胞,向干细胞中加入20nm大小的球形金纳米颗粒,用CCK-8法检测金纳米颗粒对干细胞增殖能力的影响。收集细胞上清液,利用超速离心提取外泌体,送投射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析仪检测。以Western Blot检测金纳米颗粒对干细胞自噬的影响,导入RFP-GFP-LC3慢病毒检测自噬流,溶酶体探针检测溶酶体酸碱度,透射电镜观察细胞内内体系统的变化。结果:1.利用柠檬酸还原法法合成的球形金纳米颗粒大小均一,形态呈球形,紫外吸收峰在540nm左右;金纳米颗粒具有良好的生物相容性,低于30μg/ml的浓度对干细胞增殖活性和形态无明显影响。2.球形金纳米颗粒处理后的干细胞分泌的外泌体量明显多余未处理组。大量的纳米颗粒聚集在多囊泡体内。3.球形金纳米颗粒处理后细胞溶酶体碱化、自噬小体同溶酶体融合受阻。结论:球形金纳米颗粒能阻断细胞自噬流,有效促进大鼠骨髓间充质干细胞分泌外泌体。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2
【图文】：

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图 1.球形金纳米颗粒的扫描电镜图Figure1. Scanning electron micrograph of spherical gold nanoparticles注：A 图为粒径为 10nm 的球形金纳米颗粒扫描电子显微镜图；B 图为粒径 20nm 的球形金纳米颗粒扫描电子显微镜图；C 图为粒径为 50nm 的球形金纳

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图 2.球形金纳米颗粒粒径分布图Figure2.Size distribution of spherical gold nanoparticles注：A 图为粒径为 10nm 的球形金纳米颗粒粒径分布图；B 图为粒径为 20nm球形金纳米颗粒粒径分布图；C 图为粒径为 50nm 的球形金纳米颗粒粒径分布

【参考文献】