探究新型疫苗佐剂壬二酸和S-2-羟基戊二酸佐剂效应

发布时间：2020-07-10 06:59

【摘要】：佐剂是一种用于疫苗中,提高机体对抗原的的免疫应答,也可以改变免疫应答类型的物质。自20世纪初佐剂被发现以来,佐剂被广泛应用于改善以及增强疫苗对机体的免疫应答。比如铝佐剂。但铝佐剂不适于重组蛋白和亚单位疫苗,也会产生不良反应,如炎症,刺激局部产生红斑,肉芽肿,皮下结节,接触性皮炎,IgE介导的超敏反应,铝佐剂也不能诱导细胞毒性T细胞应答。目前,尽管已经有大量新型疫苗佐剂处于研究开发和临床试验阶段,但是真正获得批准用于人类疫苗的佐剂屈指可数。因此研发新型的疫苗佐剂在疫苗的研发中具有重要的作用。本次实验旨在探索壬二酸(anchoecacid)和 S-2-羟基戊二酸((2S)-Hydroxyglutaricacid Disodium Salt)分别作为佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗(live hepatitis A virus attenuated live vaccine,HepA-1)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价它们的佐剂效应。壬二酸是一种具有多种活性的复合分子,具有抗炎、抗感染和抗菌作用。除此之外,壬二酸不仅在治疗痤疮、黑色素瘤还在治疗黄褐斑、酒糟鼻、色素过度沉着及硬化症等方面都有广泛应用。已有临床研究证实壬二酸长期应用于人体安全性高、副作用小、病人的耐受性较好,不会出现细菌耐药性,因此推测其具备潜在的疫苗佐剂效应。S-2-羟基戊二酸为一种钠盐,易溶于水,与酸反应生成2-羟基戊二酸,二者结构类似。研究报道2-羟基戊二酸与肿瘤疾病的发生相关。在实验设计过程中参考了砒霜在医学上的应用,探究S-2-羟基戊二酸是否具有佐剂效应。实验中将甲型肝炎减毒活疫苗HepA-1(18 EU)与4种不同剂量的壬二酸以及4种不同剂量S-2-羟基戊二酸分别混合作为佐剂组、实验组,同时设空白对照组、单纯抗原组、铝佐剂组。实验小鼠经背部皮下多点注射,共免疫一次,于免疫后4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血。采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV)IgG抗体水平。在整个实验期间,对小鼠的健康状况以及饮食等进行观察,并于实验结束时,取阴性对照组及实验组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等主要器官制作病理切片进行病理学分析。实验结果表明,壬二酸和S-2-羟基戊二酸都具有佐剂效应。在本次的实验中,S-2-羟基戊二酸的佐剂效应甚至优于铝佐剂。在壬二酸和S-2-羟基戊二酸安全性试验中,实验期间各组小鼠未出现蜷缩、竖毛、搔鼻、抽搐、体重下降、死亡等情况。壬二酸的最佳剂量组和阴性对照组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织病理分析均未观察到明显病理学改变。S-2-羟基戊二酸的最佳剂量组和阴性对照组小鼠的各主要组织器官进行病理分析,均未观察到明显的病理学改变。表明壬二酸和S-2-羟基戊二酸安全性良好。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：

呼吸困难、水肿及休克等异常反应；进食、水、粪便和精神等均正常；注射部位无逡逑红肿、结节。观察空白对照组和最佳剂量组（壬二酸３ｍｇ）小鼠的病理切片，两组逡逑小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织均无异常表现，均未观察到病变（图２）。逡逑证明了壬二酸作为佐剂具有良好的安全性。逡逑最佳剂量组逦空白对照组逡逑伣＿逡逑■—邋＿逡逑肾逡逑…逦＇邋：参－、？：逡逑心逡逑图２小鼠各脏器组织的病理学观察（除脾是ＨＥ染色，ｘｌ0外，其余都是ＨＥ染色，ｘ２0）逡逑Ｆｉｇ邋２．邋Ｐａｔｌｉｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｖａｒｉｏｕｓ邋ｏｒｇａｎｓ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋（Ｉｎ邋ａｄｄｉｔｉｏｎ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋ｓｐｌｅｅｎ邋ｉｓ邋ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ，邋ｘ邋１０？逡逑ｔｈｅ邋ｒｅｓｔ邋ａｒｅ邋ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｘ邋２０）逡逑２２逡逑

喷嚏、呼吸困难、水肿及休克等异常反应；进食、水、粪便和精神等均正常；注射逡逑部位无红肿、结节。观察空白对照组和最佳计量组（Ｓ－２－轻基戊二酸０．１２ｍｇ）小鼠逡逑的病理切片，两组小鼠的心脏、肝脏、肺脏、肾脏组织均无明显异常（图４）。证逡逑明了邋Ｓ－２－轻基戊二酸作为佐剂具有很好的安全性。逡逑空白对照组逦最佳剂量组逡逑ａ．：？逦＿逦厂＇：；逦－邋ｖ逡逑＾ｈｈｈ＾ｈｉｈｉｉ逡逑Ｉ邋澊Ｉｓ＇５逦＞邋＂邋，、，逡逑sE~|．＇ｉ逡逑、兮逦Ｉ：广：＇．Ｖ－１００ａ？逡逑图４小鼠各脏器组织的病理学观察（ＨＥ染色，ｘｉｏ）逡逑Ｆｉｇ邋４．邋Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｖａｒｉｏｕｓ邋ｏｒｇａｎｓ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋（ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｘ邋１0）逡逑３．讨论逡逑自从几百年前的牛疸疫苗诞生以及其他的各种适用于人类疾病的疫苗以来，疫逡逑苗拯救了数以万计的生命，接种疫苗也成为当代最经济、最方便的医疗干预方法［８（）］。逡逑疫苗佐剂在一定程度上可以提高免疫力低下等群体对疫苗的免疫应答以及降低疫逡逑苗的生产成本、延长疫苗作用时间等作用。随着科学技术的进步，佐剂从一开始的逡逑铝盐佐剂到现在的用于流感疫苗的ＭＦ５９、含脂类佐剂、细胞因子类佐剂、核酸类逡逑３４逡逑

【参考文献】

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本文编号：2748603