蛋白激酶C-δ在机体抗感染固有免疫中的作用研究
发布时间：2020-07-16 08:27
【摘要】：蛋白激酶C(PKC)家族是一大类亚型多、分布广、功能重要的丝/苏氨酸(ser/thr)激酶,参与机体多种重要的生理生化反应。本研究主要探讨PKC-δ在机体抗感染固有免疫中的功能。巨噬细胞及中性粒细胞作为固有免疫系统重要组分在第一道免疫防线中发挥着重要功能。结核分枝杆菌感染引起的结核病及白色念珠菌感染引起的深部真菌感染性疾病正严重危害着人类健康及生活质量。此研究目的在于探讨PKC-δ在巨噬细胞抗结核分枝杆菌中的作用及PKC-δ在中性粒细胞杀灭白色念珠菌中的功能,进而探究PKC-δ在机体抗感染固有免疫中可能发挥的作用。体外TDB刺激巨噬细胞实验,结果发现:(1)与WT比,TDB介导的PKC-δ-/-小鼠BMDM产生的TNFα明显减少(2)与WT比,PKC-δ-/-的BMDM产生的TNFα mRNA转录水平明显降低。(3)与WT小鼠比,PKC-δ-/-后TDB诱导IkBα降解明显减少。(4)TDB诱导WT BMDM Mincle蛋白表达上调,PKC-δ-/-的则不上调。(5)与WT比,PKC-δ-/-BMDM中TDB诱导的MinclemRNA水平明显降低。另外,检测了 PKC-δ在中性粒细胞抗真菌感染固有免疫中的作用。白色念珠菌感染小鼠,结果发现:(1)与WT小鼠比,PKC-δ-/-小鼠的死亡率明显增加。(2)与WT小鼠比,PKC-δ-/-小鼠的肾脓肿和菌负荷明显增加。(3)病理结果显示PKC-δ-/-小鼠肾组织大量菌丝生长和炎症细胞浸润。接着Zymosan刺激中性粒细胞进行体外实验,结果发现:(1)与WT比,PKC-δ-/-中性粒细胞杀灭白色念珠菌能力降低。(2)中性粒细胞对白色念珠菌的吞噬作用不依赖PKC-δ。(3)与WT比,Zymosan诱导的PKC-δ-/-中性粒细胞ROS产生显著降低。综上,PKC-δ在巨噬细胞抗结核分枝杆菌以及在中性粒细胞杀灭白色念珠菌中都起到了重要作用,证明PKC-δ在机体抗感染固有免疫中发挥重要作用。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：
图１．２ＮＦ－ｋＢ的活化｜７８］逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ．２邋ＮＦ－ｋＢ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ１，Ｓ！逡逑
因此ＢＭＤＭ的纯度鉴定是非常必要的。如前所述提取出小鼠骨髓细逡逑胞后诱导培养成熟的巨噬细胞，用巨噬细胞表面特异性Ｆ４／８０＋ＣＤｌｌｂ＋标记，并逡逑用流式细胞术进行了纯度鉴定，左为不诱导阴性对照组。结果如图３．２所示逡逑丨丨卜丨晒｜逡逑；邋ｉ邋ｒＶ邋０邋０４３邋－邋ｉ逦９Ｓ７逡逑ｉｊ逦％邋Ｉ逡逑８逦１逦Ｈ逡逑ａ逦ｉ．一．．．．．逡逑ｌｏｗｗ榦择逦＾逦？？逦＇？邋＾逦＇＊邋ｔ．邋＇邋９逡逑ＣＯ邋ｌｉｂ邋叹，ｎ邋？：邋’逦飞．0．邋？邋ｗ、逡逑图３．２巨噬细胞纯度鉴定结果逡逑结果显示：骨髓细胞经Ｌ９２９诱导培养成熟的细胞，经鉴定后巨噬细胞的纯逡逑度高达９８％以上，诱导纯度高效果较好，可以用于后续实验。逡逑３．２．２邋ＰＫＣ－Ｓ缺失对ＴＤＢ诱导巨噬细胞细胞因子产生的影响逡逑之前通过结核分枝杆菌诱导小鼠炎症模型的体内研[偡⑾郑海校耍茫釉冢裕模湾义嫌盏嫉男∈笕硌字⒎矫嬗忻飨宰饔谩Ｕ饫镏饕窍胪ü逋庀赴碳な笛椋义瞎鄄欤校耍茫尤笔Ф韵嗤碳は戮奘上赴喙叵赴蜃臃置诓挠跋臁Ｓ缅义希玻刀郑恚戾澹裕模路直鸫碳ぃ祝院停校耍茫郑啃∈蟮模拢停模湾澹玻矗瑁澹牛蹋桑樱良觳馄渖锨澹义媳冉希祝院停校耍茫Ｐ∈缶捺拖赴谑艿剑裕模麓碳ず笙喙叵赴蜃樱裕希疲铮舻姆皱义厦谇榭觥＝峁⑾郑河茫裕模麓碳ぃ祝孕∈蟮木奘上赴湎赴蜃樱裕危疲岬姆皱义希常冲义
本文编号：2757768
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：
图１．２ＮＦ－ｋＢ的活化｜７８］逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ．２邋ＮＦ－ｋＢ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ１，Ｓ！逡逑
因此ＢＭＤＭ的纯度鉴定是非常必要的。如前所述提取出小鼠骨髓细逡逑胞后诱导培养成熟的巨噬细胞，用巨噬细胞表面特异性Ｆ４／８０＋ＣＤｌｌｂ＋标记，并逡逑用流式细胞术进行了纯度鉴定，左为不诱导阴性对照组。结果如图３．２所示逡逑丨丨卜丨晒｜逡逑；邋ｉ邋ｒＶ邋０邋０４３邋－邋ｉ逦９Ｓ７逡逑ｉｊ逦％邋Ｉ逡逑８逦１逦Ｈ逡逑ａ逦ｉ．一．．．．．逡逑ｌｏｗｗ榦择逦＾逦？？逦＇？邋＾逦＇＊邋ｔ．邋＇邋９逡逑ＣＯ邋ｌｉｂ邋叹，ｎ邋？：邋’逦飞．0．邋？邋ｗ、逡逑图３．２巨噬细胞纯度鉴定结果逡逑结果显示：骨髓细胞经Ｌ９２９诱导培养成熟的细胞，经鉴定后巨噬细胞的纯逡逑度高达９８％以上，诱导纯度高效果较好，可以用于后续实验。逡逑３．２．２邋ＰＫＣ－Ｓ缺失对ＴＤＢ诱导巨噬细胞细胞因子产生的影响逡逑之前通过结核分枝杆菌诱导小鼠炎症模型的体内研[偡⑾郑海校耍茫釉冢裕模湾义嫌盏嫉男∈笕硌字⒎矫嬗忻飨宰饔谩Ｕ饫镏饕窍胪ü逋庀赴碳な笛椋义瞎鄄欤校耍茫尤笔Ф韵嗤碳は戮奘上赴喙叵赴蜃臃置诓挠跋臁Ｓ缅义希玻刀郑恚戾澹裕模路直鸫碳ぃ祝院停校耍茫郑啃∈蟮模拢停模湾澹玻矗瑁澹牛蹋桑樱良觳馄渖锨澹义媳冉希祝院停校耍茫Ｐ∈缶捺拖赴谑艿剑裕模麓碳ず笙喙叵赴蜃樱裕希疲铮舻姆皱义厦谇榭觥＝峁⑾郑河茫裕模麓碳ぃ祝孕∈蟮木奘上赴湎赴蜃樱裕危疲岬姆皱义希常冲义
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