HO-1基因修饰对胎盘间充质干细胞功能的影响

发布时间：2020-07-17 13:16

【摘要】：第一部分 HO-1基因对胎盘间充质干细胞(PMSCs)生存能力的作用目的 探讨在缺氧条件下HO-1基因修饰对胎盘间充质干细胞(PMSCs)生存能力的影响。方法 1、分离、培养PMSCs;2、使用慢病毒转染PMSCs,使其稳定表达HO-1基因。3、检测上调HO-1基因后的PMSC在缺氧条件下的增殖、凋亡、迁移能力。结果 1、将胎盘组织分离出PMSCs并培养。3天后可见呈克隆样生长的梭形细胞,10天可达80%汇合。2、慢病毒转染的PMSCs可高表达HO-1基因及蛋白。3、HO-1过表达组细胞的增殖能力、迁移能力明显提高,凋亡减少。结论 HO-1修饰后的PMSCs在缺氧条件下存活能力提高。第二部分 缺氧条件下HO-1参与调控PMSCs的促血管生成功能目的 研究缺氧条件下HO-1对PMSCs分泌血管生成相关因子的调控及对HUVEC功能的影响。方法 1、通过QT-PCR法检测上调HO-1基因后PMSCs中VEGF、PIGF、s Eng、s Flt-1 m RNA的表达变化。2、通过ELISA法检测上调HO-1基因后PMSCs缺氧培养上清中VEGF、PIGF、s Eng、s Flt-1蛋白的表达变化。3、使用上调HO-1基因表达的PMSCs培养上清培养HUVEC,使用CCK8法检测HUVEC的增殖、流式细胞术检测细胞凋亡。观察HO-1上调后PMSCs对HUVEC功能的影响。采用HUVEC小管形成实验分析PMSCs培养上清的促血管生成能力。结果1、上调HO-1基因后,PMSCs的在缺氧条件下血管生成相关因子VEGF、PIGF m RNA表达增高,抗血管生成因子s Flt-1、s Eng m RNA表达降低。2、上调HO-1基因的PMSCs缺氧培养上清中,VEGF蛋白表达量明显升高,s Eng蛋白表达减少。3、上调HO-1基因的PMSCs可提高HUVEC增殖能力,减少细胞凋亡。HO-1过表达组上清液培养的HUVEC小管及管腔分支点增多。结论 促进HO-1表达可以提高PMSCs分泌促血管生成因子能力,同时可作用于HUVEC并提高其细胞活性。提示HO-1修饰后的PMSCs在缺氧条件下可能具有促进血管新生成的作用。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2
【图文】：

图 1-4 人胎盘间充质干细胞表面分子的表达二、稳定表达 HO-1 蛋白的 PMSCs 的建立1.转染 PMSCs 后，过表达组合阴性对照组相比，HO-1 的 mRNA 表达明显升高（10.49±0.08430 vs.1.018±0.04148；P＜0.05）；阴性对照与空白对照相比，HO-1mRNA的表达无明显差异（1.018±0.04148 vs. 0.9425±0.1646；P＞0.05）。

图 1-7图 1-7 HO-1 过表达组细胞增殖活性高于阴性对照组（HO-1 为过表达阴性对照组，*P＜0.05）。2.迁移能力缺氧处理的 PMSCs，过表达 HO-1 组和阴性对照组相比，过表达组的目明显升高（348.2±28.82 vs.52.08±6.732，P＜0.05)。如图 1-bAsobranceaHO-1NC0.00.51.0

实验结果PMSCs 分泌血管生成相关因子.缺氧处理后，检测 PMSCs 血管生成相关因子 mRNA 的表达量，过表达 HO-1 PMSCs 组与阴性对照组相比，VEGF mRNA 的表达升高（2.908±0.3145 vs.±0.0072，P＜0.05），PIGF mRNA 的表达量升高（1.378±0.1319 vs.0.9381259，P＜0.05），sENG mRNA 表达降低（0.1366±0.0202 vs.1.051±0.1206，05），sflt-1 mRNA 表达降低（0.4044±0.0613 vs.0.9426±0.0979，P＜。如图 2-1.

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本文编号：2759487