衣原体蛋白Pgp3对银屑病小鼠模型皮损以及IL-17、IL-22、IFN-γ的影响

发布时间：2020-07-27 13:51

【摘要】：[目的]观察在银屑病小鼠模型中衣原体蛋白Pgp3的干预对皮损以及IL-17、IL-22、IFN-γ表达水平的影响。[方法]通过大肠埃希菌表达融合蛋白GST-Pgp3,通过谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化蛋白,用PreScission蛋白酶将GST标签后切除后得到蛋白Pgp3。把24只SPF饲养、体重18-20g、6-8周龄BALB/C雌性小鼠随机分成空白对照组、模型组,外涂对照组,外涂蛋白pgp3高浓度组(1000μg/ml),外涂蛋白pgp3低浓度组(50μg/ml),外涂CT795蛋白对照组。除了空白对照组外,其他5组小鼠用咪喹莫特(imiquimod,IMQ)诱导小鼠银屑病样皮损的模型,同时,除了空白对照组和模型组外,其他4组小鼠均给予干预:对照组外用PBS 200μl,外涂蛋白pgp3高浓度组外用浓度为1000μg/ml的蛋白200μl,外涂蛋白pgp3低浓度组外用浓度为50μg/ml的蛋白200μl,外涂CT795蛋白对照组外用浓度为1000μg/ml的蛋白200μl。动物实验期间每天观察小鼠背部皮损区的变化,并根据银屑病小鼠模型的评分标准(TSS)每天观察并记录下小鼠皮损的变化,并给与评分。实验完成后,处死小鼠,取小鼠皮损区组织,一部分做病理切片,并在显微镜下观察各组小鼠皮损区组织形态学的改变,一部分组织采用Real Time PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction)检测小鼠皮损中IL-17、IL-22、IFN-γRNA的表达水平并分析其变化。[结果]外用Pgp3蛋白干预的小鼠的皮损较模型组、对照组和外用CT795蛋白组明显改善,TSS评分也低于模型组、外涂对照组和外涂CT795蛋白组,Real-Time PCR结果示外用Pgp3蛋白组干预组小鼠的皮损中IL-17、IL-22、IFN-γ的表达低于模型组和CT795蛋白组,其差异有统计学意义(P0.05)[结论]在银屑病小鼠模型中,衣原体蛋白Pgp3干预后,可以抑制小鼠银屑病样皮损的发展,并且可以抑制IL-17、IL-22、IFN-γ的表达。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R758.63;R-332
【图文】：

验证结果,质粒,磁珠,标签

图 1：质粒 pGEX-6P-1（1）、Pgp3（2）验证的鉴定转化 pGEX-6P-1/Pgp3 至 E.coli BL21 感受用 IPTG 进行诱导表达，用 GST 磁珠纯化后gp3，然后用 PP 酶切除标签，得到纯化的蛋DS PAGE 电泳分别鉴定 GST-Pgp3、Pgp3小。见下图 2：

浓缩蛋白,融合蛋白,分装,超净台

图 2：纯化 GST-Pgp3 及 Pgp3 纯化与浓缩结果：A：浓缩蛋白 Pgp3；B：融合蛋白 GST-Pgp3；C：纯化蛋白 Pgp33.3 蛋白 Pgp3 的浓缩鉴定结果BCA 蛋白测定在超微量微孔板分光光度计 OD562nm 处测得浓度为2838μg/ml。在超净台内，用 PBS 将浓缩后的 Pgp3 蛋白稀释成浓度为 1000μg/ml及 50μg/ml 两种不同浓度后（注意无菌操作），然后分装在 EP 管中，每个 EP 管分装 200μl，-80℃冻存备用。见下图 3：

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【参考文献】