IL-1β对大鼠终板软骨细胞增殖的影响及机制研究
发布时间:2020-07-28 08:47
【摘要】:目的:相间盘退变为多种因素综合影响所致,有报道表明,软骨终板发生钙化所引发椎间盘营养物质供应下降为椎间盘启动的关键性因素。本实验通过培养大鼠椎体终板软骨细胞,检测ADAMTS-5蛋白的表达水平与IL-1β是否具有相关性,在IL-1β炎性因子的干预下,通过检测磷酸化p65蛋白,p65蛋白含量的变化,来探究IL-1β是否促进ADAMTS-5的表达通过NF-κB信号通路,从而促进终板软骨细胞退变,为预防和治疗椎间盘退变提供新的方法。方法:取4-6周龄大鼠椎体的终板软骨细胞进行纯化,通过原代及传代培养。选择生长较好的3代细胞进行实验,通过观察细胞的形态,来描绘细胞的生长曲线。1.采用MTT法研究不同浓度的IL-1β对大鼠终板软骨细胞增殖的影响。通过在紫外分光光度计上测定各孔光吸收值,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标,观察细胞增殖变化。2.研究不同浓度的IL-1β(5 ng/ml,10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml)对大鼠终板软骨细胞ADAMTS-5蛋白表达的影响。3.培养皿中加入10 ng/mL的IL-1β,观察24、48、96小时,大鼠椎板软骨细胞中ADAMTS-5蛋白表达量的变化。4.培养皿中加入10 ng/mL的IL-1β,设立空白对照,通过检测磷酸化p65蛋白含量,p65蛋白含量的变化,来探究IL-1β是否通过激活NF-κB信号通路促进ADAMTS-5的表达。5.将大鼠椎体终板软骨细胞分为4组,第一组为空白对照组,第二组加入10 ng/mL的IL-1β,第三组加入50 ug/ml NF-κB信号通路的阻断剂SN50,第四组加入10 ng/mL的IL-1β及50 ug/ml SN50,观察ADAMTS-5蛋白表达量的变化,从而验证IL-1β是否通过激活NF-κB信号通路促进ADAMTS-5的表达。结果:1.随IL-1β浓度增高,大鼠终板软骨细胞数目逐渐减少,且各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。2.不同浓度的IL-1β对大鼠终板软骨细胞ADAMTS-5蛋白表达与空白对照组相比都有增强,且各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。10 ng/ml的IL-1β作用最强。3.不同时间点,10 ng/ml的IL-1β对大鼠终板软骨细胞ADAMTS-5蛋白表达与空白对照组相比都有增强,且各组之间差异具有统计学意义(P0.05),48小时达到高峰。4.与空白对比,10 ng/ml IL-1β作用大鼠终板软骨细胞48小时后,p-p65蛋白浓度明显升高,而p65蛋白浓度基本保持不变。两组之间差异具有统计学意义(P0.05)。5.四组不同干预蛋白分别作用于大鼠终板软骨细胞,其ADAMTS-5蛋白表达量从高到低分别为IL-1β组,IL-1β+SN50组,空白对照组,SN50组。且各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.IL-1β能够抑制大鼠终板软骨细胞的增殖。2.IL-1β对大鼠终板软骨细胞增殖的抑制可能是部分通过影响NF-κB信号通路实现的。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R363
【图文】:
细胞培养(贴壁,细胞成梭形,多角形)
大鼠终板软骨细胞的甲苯胺蓝染色(100×)
图 3 大鼠终板软骨细胞的生长曲线owth curve of the rat endplate chondrocytes (the inoculation days, the ordinate is the OD value ultraviolet spectrophotometer )
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
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【图文】:
细胞培养(贴壁,细胞成梭形,多角形)
大鼠终板软骨细胞的甲苯胺蓝染色(100×)
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1 刘军辉;单治;王厘
本文编号:2772643
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