Mitoflash和蛋白组研究揭示线粒体在线虫衰老中的重要作用

发布时间：2020-07-31 18:59

【摘要】：生物衰老的时钟理论已经被提出几十年1,暗示线粒体是调节衰老的核心因素,但是直到目前为止,仍缺少支持证据。在本研究中,通过活体线虫的单个线粒体水平观察超氧炫来研究线粒体与生物衰老理论。线粒体超氧炫作为读码器,可以反映单个线粒体的活性氧自由基的产生和能量代谢状态2。本实验室的早期研究已经有很多发现,例如,在线虫成年第三天和第九天的咽部肌肉细胞中会分别出现两个非常强的超氧炫信号峰,第一个可能与线虫的产卵有关,第二个可能与线虫的死亡有关。 我们发现电子传递链的活性与超氧炫的发生密切相关,而且,饥饿或者激光诱导荧光蛋白所产生的超氧化合物也能够分别抑制或者增加超氧炫活性,表明超氧炫与线粒体的氧化状态和代谢活性有密切联系。此外,我采用RNAi沉默靶基因的方法使线虫寿命延长或缩短,发现两个超氧炫信号峰的位置在长寿或者短寿的线虫中确实会出现明显移动,短寿线虫的信号峰前移,长寿线虫的信号峰后移,该结果揭示了线粒体超氧炫与衰老之间有密切关系。用24种环境因素影响线虫寿命和相应的超氧炫信号,发现这些成虫第三天的超氧炫信号强度与它们的寿命呈负相关。除环境因素外,也验证了随机因素对寿命和超氧炫信号的影响,分别在长寿age-1和短寿elo-5线虫的单个个体中进行比较,发现超氧炫信号与单个线虫的寿命也呈负相关,该结果与环境因素所引起的变化非常相似。最后,研究胰岛素信号通路调节的衰老与超氧炫的关系。我们发现线粒体复合物Ⅱ和乙醛酸循环活性在长寿线虫daf-2(e1370)中上调,推测可能与daf-2突变株的长寿有关。通过研究异柠檬酸裂解酶ICL-1与寿命和超氧炫信号的关系,我们发现该酶贡献了daf-2的长寿和使超氧炫信号降低。总之,遗传因素、环境因素和随机因素是决定生物体寿命的主要因素,线粒体在这些因素引起的寿命变化中起着重要的作用。而且成虫第三天的超氧炫信号能够指示寿命。这些结果与衰老时钟理论非常吻合,暗示着在相当大程度上线虫的衰老速度在成年早期已经被决定了。 抑制胰岛素信号通路(IIS)可以延长线虫,果蝇和小鼠的寿命3。考虑到线粒体在生物衰老过程中起着重要作用4,5,我们结合定量线粒体蛋白组方法,分析线粒体在IIS中的作用。DAF-2是胰岛素受体,DAF-16是IIS下游的负调控转录因子。我们纯化了野生型线虫N2、突变体线虫daf-2和daf-2; daf-16的线粒体,通过定量蛋白组的方法分析了线粒体蛋白的丰度,鉴定了1824个线粒体蛋白。其中,有83个蛋白的表达在daf-2突变体中被上调,60个蛋白的表达被下调。通过Gene Ontology和KEGG对所有定量蛋白进行分析,发现参与线虫寿命、过氧化物清除和线粒体脂肪酸、乙醛酸、丙酸和支链氨基酸代谢的相关过程都上调。代谢网络的构建表明daf-2突变体的线粒体代谢状态处于一种和谐的上调模式。通过对该模式的上调因子进行研究,我们发现它们对daf-2突变体的长寿起着重要作用。
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R339.38

【共引文献】

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本文编号：2776873