HIV-1跨物种的鼠类细胞模型感染与病毒复制研究
发布时间：2020-09-01 15:57
目的:制备HIV-1跨物种快速易感、病毒高效复制的鼠类细胞模型。此细胞模型可用于移植鼠体内制备HIV-1感染的鼠类动物模型,以实现HIV-1跨物种鼠类动物模型的感染研究及促进HIV-1抗病毒药物筛选及疫苗制备等研究。方法:首先,应用hCD4/hCCR5/hCyclin T1慢病毒感染鼠白血病细胞株L1210细胞,实现L1210细胞高效表达HIV-1感染所需的受体hCD4、辅助受体hCCR5及Tat蛋白驱动因子hCyclin T1。其次,HIV-1感染阳性克隆L1210细胞,通过检测细胞内及细胞培养上清液中的HIV-1 RNA,验证阳性克隆L1210细胞对HIV-1的易感性及病毒复制情况。最后,将上步骤细胞培养上清液进行CEMx174细胞的感染试验,以证实HIV-1子病毒是具有感染能力的活病毒。结果:hCD4/hCCR5/hCyclin T1慢病毒感染L1210细胞后,L1210细胞高表达hCD4、hCCR5和h Cyclin T1 mRNA及相应蛋白。HIV-1感染阳性克隆L1210细胞后,HIV-1 RNA在阳性克隆L1210细胞内及细胞培养上清液中高表达。细胞培养上清液感染CEMx174细胞后,HIV-1 RNA在CEMx174细胞内高表达。结论:本课题成功构建了HIV-1跨物种易感的鼠类细胞模型,此细胞模型高效表达HIV-1感染所需的受体hCD4、辅助受体hCCR5和促转录因子hCyclin T1,使HIV-1能快速感染、病毒高效复制并分泌出具有感染能力的子代病毒。为下一步HIV-1跨物种感染鼠类动物模型的研究提供了坚实基础,也为HIV/AIDS的发病机制、抗病毒药物筛选及疫苗制备等研究提供了一个新的细胞模型。
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R512.91;R-332
【部分图文】：
图 1 不同 MOI 值慢病毒感染 L1210 细胞的 GFP 表达率用 MOI 值为 0、50、100、150、200、250、300、350、400、450 的慢病分别感染 L1210 细胞，采用流式细胞仪检测 L1210 细胞中的 GFP 荧光比率，MOI 从 50 至 150，细胞内 GFP 荧光比率不断增多，MOI 值从 150 到 450，细胞内的 GFP 荧光比率增加不显著。因此，慢病毒感染 L1210 细胞的最佳 MOI 值为 150。Figure 1 The expression rate of GFP in L1210 cells infected with different MOI lentivirusesL1210 cells were infected with lentivirus with MOI values of 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 and450, and the ratio of GFP fluorescence in L1210 cells was detected by flow cytometry. MOI values from 50to 150, the intracellular GFP fluorescence ratio increased continuously. MOI values from 150 to 450, theintracellular GFP fluorescence ratio did not increase significantly. Therefore, the best MOI value forlentivirus infected L1210 cells was 150.
图 2 不同 MOI 值的慢病毒对 L1210 细胞的感染率分析I 值为 0、50、100、150、200、250、300、350、400、450 的慢病分别感染 检测 L1210 细胞的 GFP 荧光比率，用折线图分析不同 MOI 值的慢病毒对 LMOI 从 50 至 150，慢病毒的感染效率大幅度升高，MOI 值从 150 到 450，慢显著，因此，选取 150 为慢病毒的最佳感染 MOI。ure 2 Analysis of infection efficiency rate of different MOI lentiviruses for L121 were infected with lentivirus with MOI values of 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300,e GFP fluorescence ratio of L1210 cells was measured by flow cytometry. Line Cthe infection efficiency of lentivirus tinfected L1210 Cells. MOI values from 5fficiency of lentivirus increased significantly. MOI values from 150 to 450, of lentivirus was not significantly increased. Therefore, 150 was regarded as
结果如图 3 所示。结果表明，随着天数的递增，细胞增长差异不大（图3A，p>0.05），细胞存活率也无差异（图 3 B，p>0.05）。实验证明，慢病毒感染后，细胞的生长及存活未受影响。图 3 慢病毒感染 L1210 后细胞数及存活率分析L1210 空白细胞、阴性慢病毒感染的 GFP+ L1210 细胞和阳性慢病毒感染的 GFP+ L1210 细胞均以 5x104的细胞数在 24 孔板上进行铺板培养，每 48 h 重新换液，收集第 0、2、4、6、8、10、12、14 天的细胞，测定细胞数及细胞存活率，分析数据，p>0.05。（A）不同时间各细胞的细胞数分析。（B）细胞存活率分析。Figure 3 The analysis of cell number and survival rate after Lentivirus infe
本文编号：2809943
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R512.91;R-332
【部分图文】：
图 1 不同 MOI 值慢病毒感染 L1210 细胞的 GFP 表达率用 MOI 值为 0、50、100、150、200、250、300、350、400、450 的慢病分别感染 L1210 细胞，采用流式细胞仪检测 L1210 细胞中的 GFP 荧光比率，MOI 从 50 至 150，细胞内 GFP 荧光比率不断增多，MOI 值从 150 到 450，细胞内的 GFP 荧光比率增加不显著。因此，慢病毒感染 L1210 细胞的最佳 MOI 值为 150。Figure 1 The expression rate of GFP in L1210 cells infected with different MOI lentivirusesL1210 cells were infected with lentivirus with MOI values of 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 and450, and the ratio of GFP fluorescence in L1210 cells was detected by flow cytometry. MOI values from 50to 150, the intracellular GFP fluorescence ratio increased continuously. MOI values from 150 to 450, theintracellular GFP fluorescence ratio did not increase significantly. Therefore, the best MOI value forlentivirus infected L1210 cells was 150.
图 2 不同 MOI 值的慢病毒对 L1210 细胞的感染率分析I 值为 0、50、100、150、200、250、300、350、400、450 的慢病分别感染 检测 L1210 细胞的 GFP 荧光比率，用折线图分析不同 MOI 值的慢病毒对 LMOI 从 50 至 150，慢病毒的感染效率大幅度升高，MOI 值从 150 到 450，慢显著，因此，选取 150 为慢病毒的最佳感染 MOI。ure 2 Analysis of infection efficiency rate of different MOI lentiviruses for L121 were infected with lentivirus with MOI values of 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300,e GFP fluorescence ratio of L1210 cells was measured by flow cytometry. Line Cthe infection efficiency of lentivirus tinfected L1210 Cells. MOI values from 5fficiency of lentivirus increased significantly. MOI values from 150 to 450, of lentivirus was not significantly increased. Therefore, 150 was regarded as
结果如图 3 所示。结果表明，随着天数的递增，细胞增长差异不大（图3A，p>0.05），细胞存活率也无差异（图 3 B，p>0.05）。实验证明，慢病毒感染后，细胞的生长及存活未受影响。图 3 慢病毒感染 L1210 后细胞数及存活率分析L1210 空白细胞、阴性慢病毒感染的 GFP+ L1210 细胞和阳性慢病毒感染的 GFP+ L1210 细胞均以 5x104的细胞数在 24 孔板上进行铺板培养，每 48 h 重新换液，收集第 0、2、4、6、8、10、12、14 天的细胞，测定细胞数及细胞存活率，分析数据，p>0.05。（A）不同时间各细胞的细胞数分析。（B）细胞存活率分析。Figure 3 The analysis of cell number and survival rate after Lentivirus infe
【参考文献】
相关期刊论文 前3条
1 刘方洲;张雪侠;;HIV动物模型在中医药研究中的应用及进展[J];中医研究;2015年06期
2 张高红,陈亚丽,唐宏,郑永唐;SCID-hu小鼠:HIV研究的小型动物模型[J];动物学研究;2004年04期
3 秦人;灵长类动物保护现状[J];大自然;2004年01期
本文编号：2809943
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