骨髓间充质干细胞而非条件培养液促进缺血再灌注急性肾损伤模型的修复

发布时间：2020-09-28 21:49

　　 目的:目前越来越多的证据显示干细胞是通过旁分泌/内分泌的作用促进急性肾损伤的修复。如果其保护作用是通过内分泌的作用,那么注射干细胞条件培养液应该可以取得良好效果,但目前关于此研究结论仍不统一。方法:本试验中我们通过培养骨髓间充质干细胞然后将其通过尾静脉注射的方法注入到缺血再灌注模型鼠体内,同时将条件培养液注入到小鼠的体内,在不同时间点检测病理的改变,细胞增生情况和管周毛细血管的减少来比较骨髓间充质干细胞和条件培养液对模型鼠的作用。结果:显示骨髓间充质干细胞注入改善了肾功能及肾脏病理的改变,明显降低了死亡率。骨髓间充质干细胞同时也促进了肾脏微血管的修复,减轻了管周毛细血管的丢失增加了实质细胞的增生,减少了单核-巨噬细胞的浸润,减少了凋亡细胞的数量。虽然我们鉴定出条件培养液中含有促进血管再生的细胞因子,包括肝细胞生长因子,血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子,但是在损伤修复的整个阶段我们并没有发现条件培养液有任何的促进作用。结论:在本试验中的数据显示骨髓间充质干细胞的注入可以促进肾脏的修复,可以促进管周毛细血管和肾小管上皮细胞的再生。虽然,骨髓间充质干细胞可以分泌大量的促血管生长因子,但是条件培养液并没有显示出明显的促肾脏修复的作用,提示骨髓间充质干细胞可能是通过旁分泌的机制而不是内分泌的机制起到肾脏保护作用的。本试验的结果提示在肾脏受损之后骨髓间充质干细胞可以提供一个良好的治疗手段。
【学位单位】：哈尔滨医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R692;R-332
【部分图文】：

图 1. MSCs 形态，流式细胞检测结果及诱导分化。(A)光镜显示 MSCs 具有典型的梭形的形态, 放大 100 倍. (B)显微共聚焦 CMFDA 染色是典型的梭形形态，标尺 50um. (C) 流式细胞分析显示培养的 MSCs 表达 CD73，CD90，CD105，CD44 阳性，而-CD45，CD11b 及 CD34阴性。(D)茜素红，碱性磷酸酶及油红 O 染色证实 MSCs 可以分化为脂肪细胞和骨细胞。Figure 1. The MSC phenotype,flow cytometry graphs and differentiation abilit(A). Light microscopy revealed that the MSCs had a spindle shape. MagnificationX100. (B).Confocal image of MSCs exhibit the typical morphology (Bars, 50Bm)(C)Flow cytometry analysis of one representative MSC population stained witanti-CD73, CD90, CD105, CD44, CD45, CD11b and CD34 monoclonal antibodies.(D)OiRed O staining determined differentiation to adipocytes. Alizarin Red S was useto show differentiation to osteocytes. Alkaline phosphatase staining also confirmedifferentiation to osteocytes.

30图.2. CMFDA 染色的 MSCs 在肾脏的数目比较。(A- C)显示了实验的 3,5,7 天 MSCs 到达受损肾脏的情况(D)第3天招募到右肾的MSCs。(E)柱形图显示了3,5,7天左肾及右肾MSCs随时间变化。以均数±标准差表示,#P < 0.01 与右肾比较(n=6)Fig.2. CMFDA labeled  MSCs recruited to the injured kidney. (A-C).Representative confocal image of day 3 ,5,7 post I/R injury kidney after intravenoustransfer of MSCs showing the CMFDA labeled-MSCs detected in left kidney (arrowheads).

d-MSCs detected in right kidney on days 3. (E) Graph indicating the nbeled-MSCs identified in left and right kidney with time post I/R inan values±SD.#P<0.01,vs.right kidney (Bars, 50Bm).件培养液中含有 HGF, VEGF-A and IGF-1证 MSCs 促进急性肾衰竭修复的机制，检测骨髓间充质干细胞是脏修复的生长因子，我们使用 ELISA 方法测定了 CM 中的 IGF-1，结果发现 MSCs 可以分泌 HGF, VEGF-A 和 IGF-1，CM 分时，48 小时和 72 小时，不同时间点之间没有明显的统计学差异，我们可以设想 CM 可能具有促进肾脏衰竭修复的作用，在实验可能也有明显的作用。

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本文编号：2829324