乏氧通过腺苷A2受体调节人成熟树突状细胞骨桥蛋白的表达

发布时间：2020-10-13 17:52

　　 研究目的：观察乏氧对人成熟树突细胞(mDC)分泌骨桥蛋白(OPN)的影响,探讨乏氧调节人成熟树突状细胞(mDC)骨桥蛋白(OPN)表达的机制。 方法：免疫磁珠法分离健康人外周血CD14+单核细胞,分别在常氧和乏氧条件下经GM-CSF及IL-4培养7天,体外诱导为人成熟树突细胞(mDC); ELISA检测培养上清中骨桥蛋白(OPN)水平,RT-PCR检测人成熟树突细胞(mDC)中骨桥蛋白(OPN)基因水平表达；流式细胞术(FACS)鉴定树突状细胞(DC)表型并检测成熟树突状细胞(mDC)胞内骨桥蛋白(i-OPN)表达水平；使用腺苷替代物(NECA)、特异性A2受体激动剂(CGS21680)和特异性A2受体拮抗剂(SCH 58261)探讨A2受体(A2R)在调节人mDC表达OPN中发挥的作用：利用重组人TGF-β1 (rhTGF-β1)及抗TGF-β1单克隆抗体(anti-TGF-β1 Ab)检测TGF-β1在这一过程中发挥的作用；采用SPSS13.0 for windows统计软件对数据进行统计学分析。 结果：①无论乏氧环境或常氧环境下诱导培养的树突状细胞(DC)均可达到表型成熟。 ②乏氧环境在分泌蛋白及转录水平显著上调mDCs对OPN的表达,乏氧组OPN的水平较正常氧条件下增加3.28倍,OPN mRNA水平也同步升高,差异有统计学意义(p0.05)； ③常氧条件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激动剂均能显著上调mDCs对OPN mRNA的表达及诱导OPN蛋白的分泌,A2R拮抗剂可同时在分泌及转录水平特异性抑制A2R激动剂对OPN的诱导； ④乏氧环境不能调控mDC对i-OPN的表达。 ⑤A2R信号激活与否都不参与调控mDC对i-OPN的表达。 ⑥常氧条件下,A2R激动剂促使mDCs产生TGF-β1增加1.36倍, A2R拮抗剂下调mDCs分泌TGF-β1,差异有统计学意义(p0.05)；A2R参与调控免疫调节因子TGF-β1水平,通过rhTGF-β1和阻断抗体证实TGF-β1参与调节OPN的表达。 结论：乏氧环境下高水平腺苷可通过A2R信号诱导mDC表达TGF-β1,继而调节OPN的表达。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R392.9
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本文编号：2839496