DHA通过抑制NLRP3炎性小体和NF-κB信号通路调控胎盘炎症的研究

发布时间：2020-10-18 14:25

　　 目的:高脂饮食喂养的ICR孕鼠,胎盘存在炎症。检测胎盘组织NLRP3炎性小体的活性变化。进一步建立体外人绒癌细胞JEG3炎症模型,用DHA给予干预,测试细胞相关分子水平和炎症指标的变化,旨在探讨DHA对NLRP3炎性小体和NF-κB的信号通路调控,验证DHA通过抑制NLRP3炎性小体和NF-κB信号通路调控胎盘炎症的假设,为进一步在肥胖孕妇中开展临床DHA补充提供实验证据。方法:ICR小鼠8周龄开始适应性饲喂,一周后进行合笼。受孕成功的孕鼠被随机分成两组:普通饮食对照组(C)和高脂饮食组(H),于孕18天,水合氯醛麻醉孕鼠并取其胎盘,用逆转录PCR(qRT-PCR)和Western Blotting(WB)检测胎盘中NLRP3炎症小体Caspase-1,IL-1β和NF-κB的基因和蛋白表达水平;选择人绒癌细胞JEG3,用细菌脂多糖(LPS)刺激构建细胞炎症模型,分为6组:对照组()、LPS组、LPS+DHA低浓度组、LPS+DHA中浓度组、LPS+DHA高浓度组、DHA组;CCK-8法观察不同浓度DHA对JEG3细胞活力的影响;用LPS和三磷酸腺苷(ATP)刺激JEG3细胞,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β的分泌情况;WB法检测NLRP3炎症小体各组分(NLRP3和caspase-1)和NF-κB信号通路的表达变化和IL-1β的蛋白表达情况;qRT-PCR检测相关基因mRNA水平;应用活性氧ROS探针进行荧光定量实验,观察DHA对LPS+ATP诱导JEG3细胞中ROS活性氧生成的影响。结果:高脂饮食孕鼠胎盘NLRP3、Casepase-1和IL-1βmRNA表达水平与对照组相比有升高趋势,且差异有统计学意义(P0.05),ASC和Pro-caspase-1的基因表达水平差异没有统计学意义。高脂组胎盘炎症小体组分中NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平较对照组有上调趋势,差异有统计学意义(P0.01),ASC和Pro-caspase-1蛋白表达无明显差异;IL-1β蛋白表达水平相对于对照组有上升趋势(P0.01),但Pro-IL-1β在高脂组和对照组相比,差异无统计学意义。细胞培养实验,不同浓度的DHA干预结果显示:细胞增殖/毒性测试,在不同浓度DHA的干预下,对JEG3细胞活力几乎无影响;ELISA检测细胞上清液结果显示DHA可抑制LPS+ATP诱导的IL-1β的分泌,且存在一定的剂量依存关系;在基因水平上,相对于对照组,LPS处理组导致细胞炎症的产生,NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表达有升高的趋势,差异均有统计学意义(P0.01);与LPS诱导组相比,DHA+LPS+ATP处理组对NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表达水平有一定的下调作用,且随着DHA浓度的升高,NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表达水平均有降低的趋势(P0.05);在蛋白水平上,DHA可以抑制LPS+ATP诱导的炎症信号NF-κB(P65)和炎性小体的激活,抑制NLRP3炎性小体活化、Caspase-1剪切和IL-1β的分泌(P0.05);根据荧光法检测细胞内活性氧ROS的水平,DHA可通过减少ROS的产生来减缓JEG3细胞炎症的发生。结论:DHA可能通过抑制炎性小体NLRP3的活化和NF-κB信号通路来调控胎盘炎症,改善胎儿出生结局,结果为进一步在肥胖孕妇中开展临床DHA补充提供了部分实验证据。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R392
【文章目录】：
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Abstract
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献

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本文编号：2846415